HIV-1抗原特異性CTL免疫應(yīng)答影響因素的研究.pdf

1、目前獲得性免疫缺陷綜合癥（AIDS）已成為嚴(yán)重威脅全人類健康的傳染病之一。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(HAART)能夠抑制人類免疫缺陷病毒（HIV）復(fù)制，延緩疾病進(jìn)程，是至今為止最有效的控制和治療AIDS的方法。既往研究結(jié)果表明特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）在控制人HIV復(fù)制中起關(guān)鍵作用，但該領(lǐng)域的研究主要是針對未接受HAART的HIV-1感染者，而有關(guān)HAART對HIV-1特異性CTL免疫應(yīng)答的影響的國內(nèi)外研究報道很少，研究HAART對

2、特異性CTL免疫應(yīng)答的影響對于了解HAART后感染者體內(nèi)的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)及探討免疫功能重建的內(nèi)在機(jī)理具有十分重要的意義。
　　 以往研究已經(jīng)明確人類白細(xì)胞抗原（HLA）-I等位基因影響HIV-1特異性CTL應(yīng)答及其疾病進(jìn)展，但是這些研究資料都以非中國人為研究主體的研究結(jié)果，國內(nèi)尚未見此方面研究報道。而不同人群其HLA-I等位基因頻率表現(xiàn)出豐富的多態(tài)性，中國人群HLA-I等位基因的分布頻率明顯不同其它種族。因此對我國人群進(jìn)行HL

3、A-I等位基因頻率與特異性CTL免疫應(yīng)答相關(guān)性的研究十分必要，這不僅可以了解中國HIV-1感染者的特異性CTL應(yīng)答頻率與HLA-I多態(tài)性的相關(guān)性，同時還可發(fā)現(xiàn)影響HIV-1特異性CTL應(yīng)答頻率和疾病進(jìn)展的特異性HLA-I等位基因。
　　 本研究以中國廣東地區(qū)的HIV-1感染者為研究對象，采用酶聯(lián)免疫斑點實驗（ELISPOT）技術(shù)，以HIV-1 P24區(qū)域的氨基酸序列人工合成的12個重疊肽段組成的肽段庫作為特異性肽段表位，刺激16

4、例未接受HAART治療和84例接受HAART治療的HIV-1感染者外周血單個核細(xì)胞（PBMC），檢測γ-干擾素(IFN-γ)分泌細(xì)胞頻率，分析特異性CTL免疫應(yīng)答水平，并用PCR-SSP方法檢測所有感染者HLA-I類等位基因分型，研究HAART和HLA-I類等位基因?qū)IV-1特異性CTL免疫應(yīng)答的影響。
　　 主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1．檢測100例HIV-1感染者特異性CTL免疫應(yīng)答水平后發(fā)現(xiàn)，48例感染者的

5、PBMC能夠識別HIV-1肽段表位并產(chǎn)生免疫應(yīng)答，52例感染者不能識別HIV-1肽段表位且未產(chǎn)生免疫應(yīng)答，應(yīng)答組CD4+T細(xì)胞計數(shù)大于無應(yīng)答組（P=0.01）。
　　 2．將HIV-1感染者按照HAART治療時間分為未治療組、治療時間小于12個月組和治療時間大于12個月組。對這三組的特異性CTL免疫應(yīng)答強(qiáng)度進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，治療時間大于12個月組的CTL應(yīng)答強(qiáng)度明顯大于治療時間小于12個月組和未治療組(P=0.048；P=0.027

6、)；進(jìn)一步對這三組的CD4+T細(xì)胞數(shù)進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，治療時間大于12個月組的CD4+T細(xì)胞數(shù)明顯大于治療時間小于12個月組（P=0.0003）。
　　 3．不管HAART治療與否，將HIV-1感染者按照CD4+T細(xì)胞計數(shù)分為CD4+T細(xì)胞數(shù)<200 cell/μL組，CD4+T細(xì)胞數(shù)200～350 cell/μL組，CD4+T細(xì)胞數(shù)>350 cell/μL組。其中CD4+T細(xì)胞數(shù)<200 cell/μL組特異性CTL陽性應(yīng)答率為1

7、9.4％（6/31），CD4+T細(xì)胞數(shù)200～350 cell/μL組特異性CTL陽性應(yīng)答率為61.8％（21/34），CD4+T細(xì)胞數(shù)>350 cell/μL組特異性CTL陽性應(yīng)答率為60.0％（21/35）。對這三組特異性CTL陽性應(yīng)答率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，CD4+T細(xì)胞數(shù)<200 cell/μL組特異性CTL陽性應(yīng)答率明顯低于CD4+T細(xì)胞數(shù)200～350 cell/μL組、CD4+T細(xì)胞數(shù)>350 cell/μL組（P=0.001；P

8、=0.001）。對三組HIV-1感染者的CTL應(yīng)答強(qiáng)度進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，CD4+T細(xì)胞數(shù)<200 cell/μL組的特異性CTL應(yīng)答強(qiáng)度顯著低于CD4+T細(xì)胞數(shù)200～350 cell/μL組、CD4+T細(xì)胞數(shù)>350 cell/μL組（P=0.0003；P=0.009）。對三組HIV-1感染者血漿病毒載量的檢測發(fā)現(xiàn)，三組病毒載量之間具有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.005），其中CD4+T細(xì)胞<200 cell/μL的感染組病毒量大于其它兩組（P=

9、0.004；P=0.009）。
　　 4．對入選的所有HIV-1感染者進(jìn)行HLA-I類等位基因檢測發(fā)現(xiàn)，具有不同HLA-I類等位基因的HIV-1感染者對于HIV-1肽段表位的免疫應(yīng)答反應(yīng)不同。HLA-A等位基因中陽性應(yīng)答最高的為不常見基因（57.1％），其次為HLA-A*33(55.0％)和HLA-A*11(50.8％)；HLA-B等位基因中陽性應(yīng)答最高的為HLA-B*58（61.9％），其次為HLA-B*40(54.2％)和不

10、常見等位基因（53.8％）；HLA-C等位基因中陽性應(yīng)答依次為HLA-Cw07（52.8％），HLA-Cw*03(50％)，HLA-Cw*01(45％)。
　　 5．HIV-1感染者中，攜帶HLA-B*18、-B*40和-B*58基因型的感染者特異性CTL免疫應(yīng)答強(qiáng)，以HLA-B*18/B*40雜合狀態(tài)的感染者更為明顯；HLA-B*58特異性CTL應(yīng)答強(qiáng)度和陽性應(yīng)答率明顯高于HLA-B*51（P=0.041；P=0.031）。表

11、達(dá)不常見HLA-A等位基因的感染者和表達(dá)HLA-A*11、-A*33的感染者之間盡管特異性CTL陽性應(yīng)答率和應(yīng)答強(qiáng)度無差異，但是CD4+T細(xì)胞數(shù)有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.027；P=0.019）。
　　 結(jié)論：
　　 1、如果不考慮HAART治療因素的影響，血中CD4+T細(xì)胞數(shù)越高，HIV-1抗原特異性CTL免疫應(yīng)答越強(qiáng)，二者呈正相關(guān)。
　　 2、HAART治療能提升HIV-1感染者的特異性CTL免疫應(yīng)答，延長治

12、療時間至一年以上更有助于改善特異性CTL免疫應(yīng)答。
　　 3、HIV-1病毒載量較低的HIV-1感染者擁有較強(qiáng)的特異性CTL免疫應(yīng)答。
　　 4、在我們研究的HIV-1感染者中，HLA-I等位基因分布頻率較高的為HLA-A*11（0.59），HLA-A*02（0.53），HLA-Cw*03（0.50），HLA-Cw*01（0.40），HLA-B*46（0.35）。HLA-B等位基因型別比HLA-A、HLA-Cw等位基因

13、更復(fù)雜多樣。
　　 5、HIV-1感染者的特異性CTL免疫應(yīng)答似乎與HLA-A、B、Cw等位基因分布頻率無關(guān)；擁有不同HLA-B基因型的HIV-1感染者的特異性CTL免疫應(yīng)答存在顯著性差異，而對于HLA-A基因型和HLA-Cw基因型未發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象。表明HLA-B等位基因?qū)IV-1特異性CTL免疫應(yīng)答影響最大。
　　 6、HLA-B*58、HLA-B*40、HLA-B*18基因型，可能是HIV-1肽段表位的限制性HLA-I