hTERT相關(guān)抗原肽的修飾及DC介導(dǎo)的特異性CTL的誘導(dǎo).pdf

1、人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的催化活性亞基,hTERT基因是單拷貝基因,位于5p<'15,33>,長度約有40kb,包含16個(gè)外顯子和15個(gè)內(nèi)含子.迄今發(fā)現(xiàn),端粒酶活性在大部分腫瘤組織中表達(dá),而在正常組織細(xì)胞很少表達(dá),因此將hTERT作為腫瘤免疫治療的抗原具有很高的研究價(jià)值.細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞(cytotoxic T-lymphocytes,CTLs)在

2、抗腫瘤中發(fā)揮重要作用,腫瘤相關(guān)抗原(tumor associated antigen,TAA)能誘導(dǎo)特異的抗腫瘤T淋巴細(xì)胞反應(yīng).盡管多種蛋白已被確認(rèn)可作為TAA誘導(dǎo)出特異的CTL,但是這些CTL往往只對一種或少數(shù)幾種特定的腫瘤細(xì)胞有殺傷力.基于hTERT在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的普遍性,有人設(shè)計(jì)合成hTERT特異的肽(hTERT-derived peptide),并分別在鼠和人細(xì)胞中刺激產(chǎn)生特異的CTL,這些CTL在體外可殺傷多種腫瘤細(xì)胞.我們

3、設(shè)計(jì)合成了三條hTERT相關(guān)的抗原肽,p572(RLFFYRKSV)、pY572(YLFFYRKSV)和pF572(FLFFYRKSV),p572是近期研究較多的一條與HLA A2.1分子低親和力的9肽,pY572和pF572是我們根據(jù)9肽氨基酸位置特點(diǎn)突變合成,理論上它們與HLAA2.1分子的親和力要高于p572.我們在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)pY572和pF572的免疫原性明顯高于p572,并用T2細(xì)胞作為模型在體外成功誘導(dǎo)出有活性的CTL.作為

4、專職抗原遞呈細(xì)胞,樹突狀細(xì)胞(dentritic cells,DCs)捕獲外來抗原,遷移至引流淋巴結(jié),發(fā)育成熟并遞呈抗原,啟動(dòng)和誘導(dǎo)T細(xì)胞分化產(chǎn)生免疫反應(yīng)或直接激活B細(xì)胞以及產(chǎn)生免疫記憶,其強(qiáng)大的抗原遞呈以及免疫調(diào)節(jié)能力越來越引起人們的興趣.我們采取抗原多肽負(fù)載的策略,從外周血單核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中誘導(dǎo)出成熟的DC細(xì)胞,再分1別將三條肽負(fù)載給DC細(xì)胞,經(jīng)放射線處理后