一個神經(jīng)系統(tǒng)高表達蛋白BEX1與其相互作用蛋白hSNF5的功能研究.pdf

1、我們首先克隆得到小鼠的Bex1基因,檢測小鼠不同發(fā)育時期胚胎中Bex1 mRNA的表達變化情況,發(fā)現(xiàn)它在成年鼠腦中的表達量大大低于小鼠胚胎,說明它確實與小鼠腦的發(fā)育相關.用小鼠胚胎進行的整體原位雜交顯示,Bex1在神經(jīng)系統(tǒng)高表達,尤其在前腦和側腦.用成年小鼠腦切片進行的原位雜交發(fā)現(xiàn),Bex1在神經(jīng)元中特異性表達,且在海馬中的表達量高于其它部位.因信息學分析未發(fā)現(xiàn)已知的功能結構域,為尋找人BEX1基因的功能線索,我們以BEX1全長為"誘餌

2、"蛋白,通過酵母雙雜交技術篩選人胎腦cDNA文庫,尋找與之相互作用的蛋白.結果發(fā)現(xiàn),人染色質重塑復合體SWI/SNF的核心成員hSNF5能與BEX1相互作用.為了進一步驗證這種相互作用,我們進行了GST—Pull down試驗.在大腸桿菌中表達了GST-BEX1融合蛋白,用Sepharose 4B進行親和層析純化.同時將hSNF5構建入真核表達載體pcDNA4/myc,轉染HeLa細胞后,獲得真核表達的帶myc標簽的hSNF5蛋白.GS

3、T-Pull down結果證實,BEX1和hSNF5能在體外結合.此外,免疫熒光共定位試驗顯示,兩者在細胞中的分析有重疊區(qū)域,均在細胞核中有分布.以上三種實驗結果基本證實兩者之間確實存在相互作用.為了研究BEX1可能具有的功能,我們進行了細胞周期試驗.觀察到SNF5單獨轉染G401細胞時能輕微促進細胞的增殖,BEX1與hSNF5共同轉染后,促進效果更為顯著.由于BEX1本身并未發(fā)現(xiàn)能與DNA直接結合,而hSNF5所在的染色質重塑合體單獨