Ang-（1-7）、AngⅡ、纈沙坦及卡托普利對急性心房電重構(gòu)犬心房肌細胞鉀通道電流的影響.pdf

1、目的：心房顫動(AF)是臨床上最常見的一種心律失常，其發(fā)病率隨年齡的增長而急劇增長。多年來，臨床工作者一直都在致力于為數(shù)量眾多的AF患者解除病痛，在某些方面也取得了一些進展，但仍無法徹底根治AF。目前的研究表明，腎素—血管緊張素系統(tǒng)(RAS)可能在AF電重構(gòu)和結(jié)構(gòu)性重構(gòu)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，應(yīng)用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑/血管緊張Ⅱ受體阻滯劑(ACEI/ARB)阻斷RAS可能逆轉(zhuǎn)心房重構(gòu)，從而預(yù)防AF的發(fā)生。血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-

2、7)]是近年發(fā)現(xiàn)的RAS新成員，其生理活性與血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)截然相反。目前，國內(nèi)外尚無探討Ang-(1-7)在AF時心房電重構(gòu)和結(jié)構(gòu)性重構(gòu)中作用的相關(guān)研究，而國內(nèi)對RAS在AF發(fā)生發(fā)展中作用的研究尚處在起步階段。本研究擬在以下兩方面進行觀察：(1)觀察Ang-(1-7)、AngⅡ、纈沙坦及卡托普利對正常犬心房肌細胞鉀離子通道電流的影響。(2)建立犬心房快速起搏模型，觀察上述藥物對快速心房起搏犬心房肌細胞鉀離子通道電流的影響。本研

3、究結(jié)果將有助于闡明AngⅡ參與AF發(fā)生發(fā)展的可能機制及其受體拮抗劑對心房重構(gòu)的影響，為AF的防治提供新思路和新的研究途徑。 方法：(1)正常犬心房肌細胞電生理研究：酶法分離犬心房肌單個細胞，用膜片鉗技術(shù)建立全細胞鉗制(wholecellpatch)模型，在電壓鉗制模式(V-clamp)下研究Ang-(1-7)、AngⅡ、纈沙坦及卡托普利對犬心房肌細胞主要復(fù)極性鉀離子通道電流密度(Ikr、、Ikur及Ito)的影響。(2)快速起搏

4、犬心房肌細胞電生理研究：用快速心房起搏(RAP)8h的方法建立犬急性房顫模型，然后酶法分離犬心房肌單個細胞，在電壓鉗制模式(V-clamp)下研究：①急性快速心房起搏對心房肌細胞Ikr、Iks、Ikur及Ito的影響。②Ang-(1-7)、AngⅡ、纈沙坦及卡托普利對快速心房起搏犬心房肌細胞Ikr、Iks、Ikur及Ito的影響。 結(jié)果：(1)正常犬心房肌細胞電生理實驗結(jié)果：①1μmol/LAng-(1-7)可抑制Ikr(抑制率

5、31.83±11.87％，P＜0.05)、Iks(抑制率24.85±6.37％，P＜0.05)，增加Ito(增加率41.10±10.62％，P＜0.05)，對Ikur無明顯影響；②0.5μmol/LAngⅡ可增加Ikr(增加率22.35±7.98％，P＜0.05)、Iks(增加率30.02±8.08％，P＜0.01)，抑制Ito(抑制率42.74±10.77％，P＜0.05)，對Ikur無明顯影響；③5μmol/L纈沙坦可抑制Ikr(抑

6、制率21.73±10.66％，P＜0.05)、Iks(抑制率24.37±11.22％，P＜0.05)、Ikur(抑制率23.82±9.67％，P＜0.01)及Ito(抑制率40.67±5.10％，P＜0.05)；④5μmol/L卡托普利對Ikr、Ikd、Ikur及Ito均無明顯作用(P均＞0.05)。 (2)快速起搏犬心房肌細胞電生理實驗結(jié)果：①與正常組犬比較，起搏組犬心房肌細胞Ito明顯減少(P＜0.01)，Ikr、Iks及I

7、kur無明顯變化(P均＞0.05)；②1μmol/LAng-(1-7)可抑制Ikr(抑制率33.22±12.02％，P＜0.05)、Iks(抑制率23.88±6.36％，P＜0.05)，增加Ito(增加率38.16±12.62％，P＜0.05)，對Ikur無明顯影響；③0.5μmol/LAngⅡ可增加Ikr(增加率32.65±5.23％，P＜0.05)、Iks(增加率27.94±12.53％，P＜0.01)，抑制Ito(抑制率52.24

8、±10.63％，P＜0.05)，對Ikur無明顯影響；④5μmol/L纈沙坦可抑制Ikr(抑制率26.50±5.49％，P＜0.05)、Iks(抑制率27.33±3.32％，P＜0.05)、Ikur(抑制率24.47±9.99％，P＜0.01)及Ito(抑制率35.70±7.82％，P＜0.01)；⑤5μmol/L卡托普利可抑制Ikur(抑制率26.08±7.92％，P＜0.05)、Ito(抑制率39.21±3.74％，P＜0.05)，

9、對Ikr、Iks無明顯影響(P均＞0.05)。⑥藥物對起搏組與正常組細胞鉀電流作用的比較：Ang-(1-7)及AngⅡ使起搏組Ito明顯低于正常組(P均＜0.05)，二者對兩組細胞Ikr、Iks及Ikur的影響均無顯著性差異(P均＞0.05)。纈沙坦對兩組細胞Ikr、Iks、Ikur及Ito的影響均無顯著性差異(P均＞0.05)。卡托普利使起搏組Ikur及Ito明顯低于正常組(P均＜0.05)，對Ikr及Iks的影響在兩組細胞間無顯著性

10、差異(P均＞0.05)。 結(jié)論：(1)成功建立的犬快速心房起搏模型及急性分離方法所得到的犬心房肌細胞具有心房肌細胞的典型形態(tài)特征、細胞生物學(xué)和電生理學(xué)特性。為進一步開展犬心房肌細胞分子生物學(xué)、電生理學(xué)、基因表達及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究提供了實驗基礎(chǔ)；(2)快速心房起搏(8h)使Ito減少，Ik(Ikr、Iks、Ikur)無明顯變化；(3)Ang-(1-7)及AngⅡ?qū)θ姆考【哂忻黠@的電生理作用，AngⅡ可通過對外向鉀電流的影響促進AF

11、時的心房電重構(gòu)，Ang-(1-7)作為AngⅡ內(nèi)源性拮抗劑，其對Ik及Ito作用與AngⅡ效應(yīng)相反?？赡苻卓笰ngⅡ的電生理作用；(4)纈沙坦對犬心房肌細胞IKr、Iks、Ikur及Ito均有抑制作用；卡托普利對正常犬心房肌細胞外向鉀電流無明顯作用，對起搏組犬Ikur和Ito有抑制作用，其對鉀電流的影響與正常犬心房肌細胞不同。二者對鉀電流的抑制可改善細胞動作電位時程(APD)的縮短，阻止AF時的心房電重構(gòu)，對應(yīng)用ACEI、ARB治療房性