丁苯酞對脂多糖和過氧化氫誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用.pdf

1、目的：通過體外實驗觀察丁苯酞（NBP）對脂多糖(LPS)和過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞（HUVECs）炎癥損傷和氧化應(yīng)激損傷的保護作用，探討動脈粥樣硬化的發(fā)生機制。
　　方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)。（1）LPS100ng/mL用于建立炎癥損傷模型。以不同濃度丁苯酞（0.1、1、10、100uM）預(yù)孵育細胞。運用四唑藍比色分析法（MTT法）檢測不同濃度丁苯酞及LPS刺激后HUVECs的細胞活性；Real

2、-time PCR檢測各組IL-6、IL-8、TNF-α及HMGB1 mRNA的表達水平；Western-bolt檢測各組培養(yǎng)上清液中HMGB1蛋白的含量。（2）MTT法篩選合適的H2O2濃度用于建立氧化應(yīng)激損傷模型；用篩選出的H2O2濃度誘導(dǎo)細胞，以不同濃度丁苯酞（0.1、1、10、100uM）預(yù)孵育細胞，MTT法檢測細胞活性；硫代巴比妥酸法（TBA法）檢測細胞內(nèi)MDA的含量。
　　結(jié)果：（1）不同濃度丁苯酞及加入LPS刺激后H

3、UVECs細胞活性無明顯變化；LPS刺激HUVECs后炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α、HMGB1 mRNA的表達和HMGB1蛋白釋放水平增加；丁苯酞可在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴性下調(diào)LPS誘導(dǎo)的IL-6、IL-8、TNF-αmRNA的表達，降低LPS誘導(dǎo)的HMGB1的mRNA表達和蛋白釋放。（2）H2O2刺激后細胞活性下降；丁苯酞在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴性增加H2O2誘導(dǎo)的HUVECs細胞活性；H2O2刺激后細胞內(nèi)MDA的生成量增加，