亞慢性染苯并[a]芘對大鼠神經(jīng)行為及海馬熱休克蛋白70表達的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察亞慢性染苯并[a]芘對大鼠神經(jīng)行的影響，檢測海馬Hsp70的表達，探討苯并[a]芘的神經(jīng)毒性及其作用機制。
　　 方法：
　　 第一部分：健康雄性SD大鼠40只，隨機分為空白對照、游泳對照、學習記憶、熱處理4組。采用Morris水迷宮檢測大鼠學習記憶能力的改變。行為測試結(jié)束后，18-24小時內(nèi)斷頭處死大鼠，免疫組化檢測Hsp70的表達，Western-blot檢測海馬Hsp70的表達。
　

2、　 第二部分：健康雄性SD大鼠60只，隨機分為空白對照、溶劑對照、B[a]P0.5mg/kg、1.5mg/kg、4.5mg/kg、10mg/kg6組。腹腔注射染毒90天后，采用Morris水迷宮實驗法檢測大鼠學習記憶能力的改變；行為測試結(jié)束，稱取體重后斷頭處死各組大鼠，取腦組織、肝臟、肺臟、腎臟、心臟、脾臟、睪丸，計算臟器系數(shù)；腦組織作病理切片觀察組織損傷的形態(tài)學指標；Annexin V和PI雙染法流式細胞儀檢測神經(jīng)細胞凋亡率；Wes

3、tern-blot和RT-PCR法分別檢測大鼠海馬Hsp70和Hsp70mRNA的表達；免疫組化檢測大鼠海馬Hsp70的表達。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分：大鼠短期學習記憶實驗：免疫組織化學結(jié)果顯示：空白對照組海馬各區(qū)Hsp70零星表達；游泳對照組Hsp70在海馬錐體細胞漿呈彌漫性表達，CA3區(qū)表達較少；學習記憶組Hsp70在CA3區(qū)高表達，細胞漿、突觸均有表達；熱處理組Hsp70主要在海馬錐體細胞核呈高度彌漫性表達。

4、Western-blot檢測結(jié)果顯示，學習記憶組和熱處理組的Hsp70蛋白表達值分別為0.55±0.07和0.84±0.14，顯著高于空白對照組(0.37±0.03)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 第二部分：大鼠亞慢性腹腔染毒B[a]P實驗：各組大鼠體重均增長，各染毒組大鼠體重增長速度小于空白對照和溶劑對照組。從第一個月開始，各染毒組體重均低于空白對照組，染毒結(jié)束后，各染毒組與空白組相比差異有統(tǒng)計學意義

5、(P＜0.05)，B[a]P4.5mg/kg組和B[a]P10mg/kg組與溶劑對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。
　　 定位航行實驗：B[a]P1.5 mg/kg、4.5 mg/kg和10 rng/kg組逃避潛伏期和總路程分別為32.5S、49.19S、69.74 S和313.57 cm、422.81 cm、632.60 cm，顯著高于空白對照組(17.17S和252.71 cm)和溶劑對照組(20.33S和197.08 cm)，差

6、異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)?？臻g搜索實驗：B[a]P0.5mg/kg組、1.5mg/kg組、4.5 mg/kg組、10 mg/kg組第三象限持續(xù)時間和跨越平臺次數(shù)分別為7.17S、7.93S、6.01 S、5.30 S和1.75次、1.25次、1.20次、0.50次，低于空白組(13.31S和4.20次)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；4.5 mg/kg、10 mg/kg組顯著低于溶劑對照組(9.97S和3.0次)，差異有統(tǒng)計學

7、意義(P＜0.05)。
　　 海馬病理組織學結(jié)果：常規(guī)HE染色，鏡下可見空白組大鼠海馬錐體層神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，排列整齊，隨著染苯并[a]芘劑量增加，細胞排列逐漸變零亂，B[a]P4.5 mg/kg組和10 mg/kg組可見細胞連接松解，胞漿濃縮、深染、細胞核固縮，細胞周圍出現(xiàn)環(huán)狀帶。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，B[a]P4.5 mg/kg組、B[a]P10 mg/kg組海馬細胞凋亡率顯著高于空白對照組和溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學

8、意義(P＜0.05)。
　　 RT-PCR檢測大鼠海馬Hsp70mRNA的表達，與空白對照組相比，B[a]P0.5 mg/kg組、4.5mg/kg組和10mg/kg組表達顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；與溶劑對照組相比，B[a]P10mg/kg組mRNA表達顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 Western-blot檢測大鼠海馬Hsp70表達，B[a]P4.5 mg/kg組、10 mg/kg組

9、Hsp70表達顯著降低，與空白對照組和溶劑對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 免疫組織化學染色，鏡下可見空白對照組、溶劑對照組大鼠海馬區(qū)錐體細胞層有大量免疫反應陽性神經(jīng)細胞，呈棕黃色。各染毒組部分細胞核中有Hsp70表達。B[a]P0.5mg/kg組,免疫陽性表達呈增多的現(xiàn)象。4.5 mg/kg組、10 mg/kg組Hsp70陽性表達細胞減少。
　　 相關(guān)分析結(jié)果顯示，早期凋亡率與總路程、平均逃避潛伏期、

10、穿越平臺次數(shù)具有相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r分別為0.527、0.529、-0.401，P＜0.05；大鼠海馬Hsp70表達值與平均逃避潛伏期、穿越平臺次數(shù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.428、0.446，P＜0.05；大鼠海馬Hsp70mRNA表達量與總路程、平均逃避潛伏期、第三象限持續(xù)時間、穿越平臺次數(shù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.594、-0.677、0.597、0.625，P＜0.01。
　　 結(jié)論：
　　 短期學習記憶中大鼠海