筋脈通對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)及雪旺細(xì)胞睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 從整體、細(xì)胞及分子水平，研究中藥筋脈通對糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)CNTF及其mRNA表達(dá)的作用，以及筋脈通含藥血清對高糖培養(yǎng)雪旺細(xì)胞的增殖與分泌CNTF的影響。 方法: 1.整體實驗。 制作糖尿病大鼠模型，隨機(jī)分為模型對照組、筋脈通小劑量、中劑量、大劑量組及神經(jīng)妥樂平組，每組10只。以體重、鼠齡及性別相匹配的正常大鼠10只作為正常對照組。筋脈通小、中、大組分別按成人劑量5倍、10倍和20倍給藥；神經(jīng)妥樂

2、平組按成人劑量10倍給藥。模型組和正常組予灌服蒸餾水。所有實驗大鼠灌胃16w處死。檢測各組治療前及治療后4w、8w、12W和16w的體重和血糖變化，并檢測大鼠坐骨神經(jīng)CNTF及CNTF—mRNA的表達(dá)。 2.細(xì)胞實驗。 體外培養(yǎng)雪旺細(xì)胞，S—100蛋白進(jìn)行鑒定。取第3代雪旺細(xì)胞，加入DMEM、50mmolGlu培養(yǎng)液以及含50mmolGlu的筋脈通(JMT)和神經(jīng)妥樂平(Ntp)含藥血清進(jìn)行培養(yǎng)，48h后行MTT比色試驗

3、觀察雪旺細(xì)胞增殖活性的變化，采用實時熒光定量PCR法檢測CNTF—mRNA的表達(dá)，以及激光掃描共聚焦顯微技術(shù)檢測CNTF蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果: 1.整體實驗。 (1)血糖和體重。 STZ—DM大鼠血糖值均顯著高于正常組(P<0.01)；藥物干預(yù)后，治療組血糖在同一時間點與模型組相比無明顯差異(P>0.05)；治療組間血糖在各時間點均無明顯差異(P>0.05)。干預(yù)前后，各組大鼠的體重在同一時間點無明

4、顯差異(P>0.05)。 (2)坐骨神經(jīng)CNTF表達(dá)。 模型組和各治療組的積分光密度值較正常組顯著下降(P<0.01)。各治療組積分光密度值較模型組均有顯著增高(P<0.01)。神經(jīng)妥樂平組和筋脈通中、小劑量組的積分光密度值明顯高于筋脈通大劑量組(P<0.01)。 (3)坐骨神經(jīng)CNTF—mRNA表達(dá)。 模型組及各治療組的CNTF—mRNA值均較正常組顯著降低(P<0.01)。與模型組相比，筋脈通大、中、

5、小劑量組和神經(jīng)妥樂平組的CNTF—mRNA值均有明顯上調(diào)(P<0.01)。與神經(jīng)妥樂平組相比，筋脈通大、中、小劑量組的CNTF—mRNA值明顯增高(P<0.01)。 2.細(xì)胞實驗。 (1)MTT比色實驗。 原代培養(yǎng)雪旺細(xì)胞在50mmolGlu環(huán)境培養(yǎng)48h后，OD值顯著降低(P<0.01)。與50mmolGlu組相比，JMT組與Ntp組的OD值顯著升高(P<0.05)；JMT組及Ntp組比較OD值無統(tǒng)計學(xué)差異(P

6、>0.05)。 (2)激光掃描共聚焦顯微鏡檢測。 ①50mmolGlu組及治療組雪旺細(xì)胞CNTF的熒光強(qiáng)度值較正常組明顯降低(P<0.01)。 ②與50mmolGlu組相比，JMT組與Ntp組雪旺細(xì)胞CNTF的熒光強(qiáng)度值明顯升高(P<0.01)。@JMT組與Ntp組比較無顯著差異(P>0.05)。 (3)QT-PCR法檢測。 ①50mmolGlu組及治療組雪旺細(xì)胞CNTF—mRNA表達(dá)水平較正常組

7、明顯降低(P<0.01)。 ②與50mmolGlu組相比，JMT組與Ntp組雪旺細(xì)胞CNTF—mRNA表達(dá)水平增高(P<0.01)。 ③JMT組雪旺細(xì)胞CNTF—mRNA表達(dá)水平高于Ntp組(P<0.05)。 結(jié)論: 1.整體實驗。 (1)造模后16周，DPN大鼠坐骨神經(jīng)CNTF及CNTF—mRNA表達(dá)水平顯著下降，減弱了受損神經(jīng)纖維的再生修復(fù)能力。(2)筋脈通可上調(diào)DPN大鼠坐骨神經(jīng)CNTF及其

8、mRNA的表達(dá)，提示筋脈通具有防止DPN大鼠周圍神經(jīng)組織進(jìn)一步損傷、促進(jìn)受損神經(jīng)纖維再生修復(fù)的功能。 (3)筋脈通減輕DPN大鼠坐骨神經(jīng)損傷的作用不是通過降低血糖實現(xiàn)的。 2.細(xì)胞實驗。 (1)高糖培養(yǎng)環(huán)境對雪旺細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用。 (2)高糖培養(yǎng)環(huán)境使雪旺細(xì)胞CNTF及CNTF—mRNA表達(dá)能力明顯降低。 (3)筋脈通含藥血清可有效促進(jìn)高糖培養(yǎng)雪旺細(xì)胞的增殖能力，并上調(diào)雪旺細(xì)胞表達(dá)CNTF