一 脫細胞牛心包羊肺動脈補片實驗研究;二 人腹主動脈預處理為組織工程血管研究.pdf

1、一、脫細胞牛心包羊肺動脈補片實驗研究 背景：目前治療心血管疾患使用的替代材料存在一定的局限性，缺乏抗感染、抗血栓、抗鈣化能力及潛在的生長重塑能力，最終導致移植物衰竭。組織工程為組織修復和重建提供了解決方案，它應用工程學、材料科學及生物學的原理，開發(fā)能夠維持、修復或改善組織功能的生物替代物以用于臨床，并在心血管組織工程方面取得了一些進展。 目的：采用酶-去污劑聯(lián)合脫細胞處理牛心包作為支架材料，體外進行力學性能測試和植入小鼠

2、體內評價生物相容性和鈣化情況，同時分離羊頸靜脈內皮細胞和肌成纖維細胞，培養(yǎng)擴增鑒定并分層種植到脫細胞牛心包，構建有生物活性的組織工程血管補片，植入到羊肺動脈后觀察不同時期的組織再生和重建情況。 材料與方法：新鮮牛心包按照不同的處理方法隨機分為三組，A、新鮮牛心包組；B、戊二醛處理組：新鮮牛心包采用0.5％的戊二醛進行處理；C、脫細胞組：新鮮牛心包酶-去污劑聯(lián)合脫細胞處理。對三組牛心包進行體外力學性能和熱皺縮溫度測試，植入雄性昆明

3、小鼠皮下三周觀察生物相容性和鈣化情況。采用vonKossa鈣染色檢查進行定性分析；原子吸收光譜檢查進行鈣含量定量分析。 取羊頸外靜脈5cm，膠原酶消化法獲取原代內皮細胞，組織塊貼壁法獲取原代肌成纖維細胞。內皮細胞采用Ⅷ因子免疫組化染色鑒定。將培養(yǎng)擴增好的血管肌成纖維細胞和內皮細胞靜態(tài)分層種植到脫細胞牛心包構建組織工程血管補片，體外培養(yǎng)7天后，自體細胞/脫細胞牛心包補片作為實驗組(n=5)植入羊肺動脈，分別于4周，6周，8周，12

4、周，24周取材，單純脫細胞牛心包補片作為對照組(n=3)于4周，12周，24周取材，進行大體評價和組織學檢查；測定鈣、膠原及彈性蛋白的含量。 結果：新鮮牛心包脫細胞處理后去除了細胞成分，戊二醛組的力學性能與優(yōu)于新鮮組和脫細胞組，熱皺縮溫度高于新鮮組和脫細胞組。新鮮牛心包脫細胞處理前后機械性能無明顯差異。鈣定性與定量分析結果顯示脫細胞組明顯低于戊二醛組和新鮮組，有顯著統(tǒng)計學意義。脫細胞組小鼠體內炎性細胞浸潤反應低，生物相容性好。

5、 羊頸靜脈分離培養(yǎng)的內皮細胞和種植在脫細胞牛心包的內皮細胞Ⅷ因子染色陽性。 脫細胞牛心包羊肺動脈補片實驗所有動物均存活，補片內未見血栓，無明顯動脈瘤樣擴張，兩組(實驗組n=5，對照組n=3)補片鈣含量與正常肺動脈(n=8)比較無顯著差異。補片內皮化，隨補片植入時間的遷移，彈性蛋白含量百分比增加，與正常肺動脈彈性蛋白含量相似，顯示進行性的組織重塑。 結論：牛心包脫細胞效果滿意，新鮮牛心包脫細胞處理前后機械性能無顯著差

6、異，牛心包脫細胞后小鼠皮下鈣化顯著降低，免疫源性降低，生物相容性好。無論種植細胞與否，脫細胞牛心包羊肺動脈補片在體內通過組織重塑在一定程度上可形成有活性的血管壁組織。 二、人腹主動脈預處理為組織工程血管研究 目的:發(fā)展一種組織學加工方法處理人腹主動脈，并對其進行評價以便為組織工程血管應用。 材料與方法:冷凍保存的人腹主動脈按照處理方法不同分為三組。解凍組：冷凍保存的人腹主動脈37℃生理鹽水浴處理；脫細胞組：采用酶

7、/去污劑進行脫細胞處理；脫細胞+光氧化組：脫細胞基礎上繼續(xù)光氧化處理。通過組織學、透射電鏡檢查和組織成分定量分析比較解凍組和脫細胞組之間的差異。上述三組體外進行力學性能比較，從Wistar大鼠分離的骨髓間充質干細胞接種到脫細胞+光氧化處理的人腹主動脈觀察細胞黏附情況。上述三組通過大鼠皮下模型鈣原子吸收光譜儀定量分析體內3周、9周時鈣化情況。 結果:組織學與透射電鏡檢查及組織成分分析顯示人腹主動脈脫細胞處理后未見到完整的細胞和核形