酵母雙雜交法篩選與PS1-C-,265-467-有相互作用的蛋白.pdf

1、阿爾茨海默氏病(Alzheimer’sDisease，AD)又稱(chēng)老年性癡呆，是一種最普遍的與年齡相關(guān)的癡呆性疾病。AD可分為多見(jiàn)的、散發(fā)的AD(sporadicAD，SAD)以及少數(shù)有家族遺傳史的家族性AD(familialAD，F(xiàn)AD)。FAD約占總AD的5-10％，其中約有50％的FAD是由發(fā)生在3個(gè)基因中的突變引起的，這3個(gè)基因編碼的蛋白分別為淀粉樣前體蛋白(amyloidprecursorprotein，APP)，早老素蛋白-1

2、(presenilin1，PS1)和早老素蛋白-2(presenilin2，PS2)，在這3個(gè)基因中，和FAD相關(guān)的基因突變主要是PS1基因的突變。大量研究表明PS1是組成γ-分泌酶及其發(fā)揮酶活性不可或缺的一個(gè)關(guān)鍵組分。此外，PS1還參與細(xì)胞調(diào)亡，鈣平衡，神經(jīng)突觸生長(zhǎng)，以及突觸彈性等等，但其中的機(jī)理還不清楚。由于蛋白與蛋白之間的相互作用是蛋白發(fā)揮正常生理功能的一個(gè)重要條件，因此，對(duì)PS1的正常生理功能進(jìn)行研究的一個(gè)關(guān)鍵是弄清楚和PS1相

3、互作用的蛋白分子。在此，我們應(yīng)用酵母雙雜交的方法對(duì)能與PS1的C265-467片段發(fā)生相互作用的蛋白進(jìn)行篩選，以期為研究PS1的生理功能和AD的發(fā)病機(jī)理提供依據(jù)。 根據(jù)文獻(xiàn)資料和對(duì)PS1結(jié)構(gòu)的分析，我們選擇PS1從loop直到C-末端(265-467個(gè)氨基酸)的區(qū)域?yàn)槟繕?biāo)片段，以此構(gòu)建誘餌蛋白。通過(guò)對(duì)人胎腦文庫(kù)進(jìn)行篩選，我們得到幾個(gè)陽(yáng)性克隆。經(jīng)測(cè)序和序列比對(duì)，我們選擇No.8和No.15進(jìn)行深入研究。No.8與人的CHIP(ca

4、rboxylterminusoftheHsc70-interactingprotein)序列同源性為98％。No.15與人的CDC42(GTPbindingprotein，25kDa)序列同源率為99％，β-半乳糖苷酶活性測(cè)定說(shuō)明No.8和No.15在酵母AH109中都可以與PS1的C265-46片段發(fā)生相互作用。 本研究首次證明CHIP和CDC42與PS1-C265-467在酵母AH109中存在相互作用。CHIP有可能在正常生