增殖誘導(dǎo)配體（APRIL）與人類γδT細(xì)胞的功能相關(guān)性研究.pdf

1、γδT細(xì)胞兼具特異性和非特異性免疫應(yīng)答雙重特征，它在機(jī)體免疫應(yīng)答中的生物學(xué)意義與功能有待于進(jìn)一步闡明。 增殖誘導(dǎo)配體(aproliferation-inducingligand，APRIL)，屬于TNF超家族。Ⅱ型跨膜蛋白，全長250個氨基酸。研究表明，APRIL除了可促進(jìn)腫瘤的形成和腫瘤細(xì)胞的增殖和存活外，亦在免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用。外源性APRIL分子可促進(jìn)初始B細(xì)胞和αβT細(xì)胞的增殖及αβT細(xì)胞的存活，并能提高外周血B細(xì)胞分泌

2、IgM的能力。然而，有關(guān)APRIL與γδT細(xì)胞的關(guān)系尚未見系統(tǒng)報道。本論文旨在初步探討APRIL與人類γδT細(xì)胞的功能相關(guān)性，研究APRIL和其相應(yīng)受體BCMA和TACI在γδT細(xì)胞中的表達(dá)情況，以及對γδT細(xì)胞增殖的影響，以期為闡明APRIL的生物學(xué)意義及γδT細(xì)胞的功能研究提供資料。 本論文包括兩個部分。在第一部分中，我們利用人外周血單個核細(xì)胞的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物模板，克隆了APRIL的全長cDNA，并通過His融合表達(dá)載體，將AP

3、RIL基因重組到原核表達(dá)載體pET30a的EcoRI和HindⅢ位點之間。陽性的重組子在大腸桿菌BL21中進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。誘導(dǎo)后的蛋白以包涵體的形式出現(xiàn)。復(fù)性純化后的的融合蛋白保持了原有的免疫原性，并免疫小鼠制備單克隆抗體。通過Western印跡分析證明該單克隆抗體具有較好的免疫學(xué)活性，可以直接用于免疫印跡和ELISA檢測。APRIL單克隆抗體的制備為后續(xù)的研究奠定了基礎(chǔ)。 在第二部分中，我們首先利用固相擴(kuò)增的方法從人外周

4、血中擴(kuò)增出Vγ9/Vδ2γδT細(xì)胞。采用RT-PCR技術(shù)分析了APRIL及其特異性受體BCMA和TACI在表達(dá)狀況。Western印跡對γδT細(xì)胞總蛋白提取物和膜蛋白提取物進(jìn)行了分析。 并利用激光共聚焦掃描顯微鏡技術(shù)對APRIL在Vγ9/Vδ2γδT細(xì)胞膜表面的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測。最后，利用體外增殖實驗，探討APRIL分子是否對Vγ9/Vδ2γδT細(xì)胞具有直接刺激作用。研究結(jié)果顯示，Vγ9/Vδ2γδT細(xì)胞可以以分泌型蛋白的形式