凋亡相關基因及其交互作用與食管鱗癌生物學特性的臨床研究.pdf

1、目的：1）通過研究食管鱗癌不同組織部位膜轉運蛋白-166（TMEM166）在轉錄水平的表達與食管鱗癌不同組織部位細胞早期凋亡率，探討TMEM166與食管鱗癌不同組織部位細胞早期凋亡率的關系；2）通過研究食管鱗癌不同組織部位中程序化細胞死亡蛋白5（PDCD5）在轉錄和翻譯水平的表達及其相關性，探討PDCD5與食管鱗癌病理特征的關系；3）研究食管鱗癌不同組織部位中TMEM166、PDCD5、Tip60、MDM2mRNA與p53蛋白的表達，探

2、討TMEM166、PDCD5、Tip60、MDM2mRNA與p53蛋白與食管鱗癌病理特征的相關性及其在食管鱗癌不同部位組織中的交互作用。
　　 方法：1）標本收集：選用新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院2008年5月～2009年4月手術切除的85例術前未進行抗腫瘤治療的食管鱗狀細胞癌新鮮手術標本，分別留取癌組織、癌旁組織、遠癌組織標本；2）按照性別、民族、年齡、臨床分期匹配（2009年第七版UICC國際食管癌分期），選擇I期、II期、II

3、I期各12例共36例食管鱗癌、遠癌組織手術標本，應用流式細胞術、RT-PCR、免疫組化的方法，分別對食管鱗癌組織、遠癌組織細胞的早期凋亡率、TMEM166mRNA、TMEM166蛋白表達進行檢測；RT-PCR、Western-blot檢測食管鱗癌組織不同部位PDCD5mRNA、PDCD5蛋白的表達，分析PDCD5mRNA、PDCD5蛋白的相關性及與食管鱗癌的病理特征的關系；3）85例食管鱗癌及遠癌組織RT-PCR檢測TMEM166、PD

4、CD5、Tip60、MDM2mRNA表達，免疫組化檢測p53蛋白表達，分析上述基因表達與食管鱗癌的病理學特點及上述基因間的交互作用；4）統(tǒng)計學方法：用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差表示，均數(shù)比較采用方差分析（ANOVA）、SNK檢驗（Student-Newman-Keuls）、χ2檢驗、Pearson積差相關分析；分類資料采用t檢驗、R×C列聯(lián)表確切概率法、Spearman等級相關分析。檢驗水準α=0.05

5、。
　　 結果：1）食管鱗癌組織TMEM166 mRNA表達（1.1214±0.2262）低于遠癌組織（1.4645±0.3396）（P=0.014）；TMEM166基因表達隨病變分期增加呈下降趨勢（rs=-0.357，P=0.033）；2）食管鱗癌組織細胞早期凋亡率（2.1563±0.4740）高于遠癌組織（1.6313±0.3121）（P＜0.001），食管鱗癌組織細胞早期凋亡率與食管鱗癌臨床分期負相關（rs=-0.584，

6、P＜0.001），與TMEM166基因表達正相關（r=0.310，P=0.036）；3）與遠癌組織相比，食管鱗癌組織中TMEM166蛋白亞細胞定位發(fā)生改變；4）食管鱗癌組織中PDCD5蛋白表達（0.4387±0.1632）低于遠癌組織（0.5659±0.2272），隨臨床分期增加，其表達量有進一步下調(diào)的趨勢（rs=-0.678，P＜0.001；rs=-0.619，P＜0.001）；PDCD5mRNA的表達與蛋白表達高度相關（r=0.71

7、5，0.781）；PDCD5mRNA及蛋白表達水平與食管鱗癌的腫瘤侵潤深度、淋巴結分期、分化程度的相關性不均衡；5）食管鱗癌組織細胞中，TMEM166mRNA、PDCD5mRNA表達受抑制，MDM2mRNA、p53在食管鱗癌組織中存在過表達；6）Tip60在食管鱗癌、遠癌組織的表達未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學差異（0.7359±0.2489 vs 0.7204±0.1512，P=0.012）；7）食管鱗癌腫瘤侵潤深度與PDCD5 mRNA負相關（rs=

8、-0.220，P=0.043），與p53蛋白、Tip60mRNA正相關（rs=0.443，0.523；P＜0.001）。淋巴結分期與TMEM166、PDCD5 mRNA負相關（rs=-0.593，-0.416；P=0.008，0.013）；與Tip60、MDM2 mRNA正相關（rs=0.273，0.182；P=0.038，0.009）。腫瘤細胞G分級與TMEM166mRNA負相關（rs=-0.423，P=0.029）；與MDM2 mR

9、NA、P53蛋白正相關（rs=0.442，0.299；P=0.027，0.045）；8）食管鱗癌組織中TMEM166 mRNA與PDCD5 mRNA正相關（rs=0.516，P＜0.001），與Tip60 mRNA、MDM2 mRNA、p53蛋白負相關（rs=-0.236，-0.453，-0.426；P=0.015，＜0.001，＜0.001）；PDCD5 mRNA與Tip60、MDM2 mRNA及p53蛋白負相關（rs=-0.417，

10、-0.631，-0.589；P＜0.001）；Tip60 mRNA與MDM2 mRNA、p53蛋白正相關（rs=0.388，0.321；P＜0.001，0.001）；MDM2 mRNA與p53蛋白正相關（rs=0.440，P＜0.001）；9）食管鱗癌遠癌組織中TMEM166 mRNA與PDCD5 mRNA正相關（rs=0.305，P=0.002）；PDCD5 mRNA與MDM2 mRNA、p53蛋白負相關（rs=-0.315，-0.2

11、10；P=0.001，0.031）；MDM2 mRNA與p53蛋白正相關（rs=0.221，P=0.023）。
　　 結論：1）食管鱗癌組織細胞早期凋亡率增高，TMEM166 mRNA在食管鱗癌的表達受抑制；TMEM166蛋白定位的改變可能導致TMEMmRNA表達量的下降和該基因功能的變化；2）PDCD5與食管鱗狀細胞癌的發(fā)生有關，PDCD5mRNA的表達與蛋白表達高度相關；3）食管鱗癌組織細胞中，TMEM166、PDCD5mR