宮內(nèi)發(fā)育受限大鼠出生后Ghrelin及其受體GHSR的表達(dá)與追趕生長的關(guān)系.pdf

1、文分為三部分： 第一部分 食物限制法建立宮內(nèi)發(fā)育受限大鼠模型以及對(duì)新生仔鼠重要器官的影響 目的：比較在妊娠期不同階段進(jìn)行不同程度食物限制建立宮內(nèi)發(fā)育受限(IUGR)大鼠模型的方法，觀察孕鼠妊娠期食物攝入限制對(duì)其分娩的小于胎齡(SGA)新生仔鼠的體格及重要器官發(fā)育的影響。 方法：將妊娠大鼠隨機(jī)分為四組：三組限食組和一組對(duì)照組，限食組分別予妊娠全程中度、妊娠后期重度、妊娠中后期重度食物攝入限制。比較各組新生仔鼠的體格

2、發(fā)育及重要器官的重量，以及活產(chǎn)SGA的發(fā)生率。光鏡下觀察大腦和胃粘膜的組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果：妊娠全程中度食物限制法所致新生仔鼠SGA發(fā)生率最高(62.2％)。各限食組存活新生鼠體重、身長、尾長、腦、心、肺、肝、胃、脾、腎重量與對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。限食組SGA仔鼠大腦和胃粘膜有明顯的組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)論：妊娠全程中度食物攝入限制法可獲得較高的SGA發(fā)生率和活產(chǎn)率。孕期食物攝入限制可導(dǎo)致新生

3、仔鼠腦、胃等重要器官的組織形態(tài)學(xué)變化。 第二部分　Ghrelin mRNA和蛋白在SGA仔鼠胃底組織中的表達(dá)變化 目的：了解胃底組織Ghrelin mRNA和蛋白表達(dá)與SGA仔鼠追趕生長的關(guān)系。 方法 采用妊娠全程中度、妊娠后期重度、妊娠中后期重度食物攝入限制法建立IUGR大鼠模型，獲得SGA仔鼠。分別于0日齡、20日齡、40日齡三個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組隨機(jī)抽取仔鼠10只，測(cè)量并記錄體重、身長、尾長，處死后獲取胃底組織，

4、采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(real-time FQ-PCR)測(cè)定Ghrelin mRNA、免疫組織化學(xué)法測(cè)定Ghrelin蛋白在各組仔鼠胃底組織中的表達(dá)，比較0日齡限食組SGA、限食組AGA和正常對(duì)照組AGA仔鼠之間，以及20日齡和40日齡SGA未追趕生長仔鼠、SGA追趕生長仔鼠和正常對(duì)照組AGA仔鼠之間是否存在差異。 結(jié)果：0日齡限食組SGA仔鼠胃底組織中Gherlin mRNA表達(dá)高于限食組AGA仔鼠和對(duì)照組AGA仔鼠(p<

5、0.05)；20日齡和40日齡的SGA未追趕生長仔鼠、SGA追趕生長仔鼠和對(duì)照組AGA仔鼠胃底組織中Gherlin mRNA表達(dá)無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。0日齡限食組SGA仔鼠胃底組織中Ghrelin免疫陽性細(xì)胞的IOD值高于限食組AGA和對(duì)照組AGA仔鼠(p<0.05)；20日齡SGA追趕生長仔鼠胃底組織中Ghrelin免疫陽性細(xì)胞的IOD值高于SGA未追趕生長仔鼠和對(duì)照組AGA仔鼠(19<0.05)；40日齡時(shí)三者間則無顯著

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 結(jié)論：0日齡SGA仔鼠Ghrelin mRNA在胃底組織中表達(dá)增加，提示Ghrelin可能在宮內(nèi)就開始參與IUGR胎鼠的生理調(diào)節(jié)或病理過程，或是宮內(nèi)的營養(yǎng)狀況和環(huán)境變化對(duì)胎鼠胃底細(xì)胞的生理功能產(chǎn)生了影響，使得Ghrelin mRNA表達(dá)上調(diào)；生后20日齡追趕生長SGA仔鼠胃底Ghrelin表達(dá)的變化進(jìn)一步提示，Ghrelin可能參與了SGA早期的追趕生長調(diào)控，但其作用有待進(jìn)一步闡明。 第三部

7、分　GHSR mRNA和蛋白在SGA仔鼠下丘腦中的表達(dá)變化及其意義 目的：了解下丘腦GHSR mRNA和蛋白表達(dá)與SGA仔鼠追趕生長的關(guān)系并探討其臨床意義。 方法： 采用妊娠全程中度、妊娠后期重度、妊娠中后期重度食物攝入限制法建立IUGR大鼠模型，獲得SGA仔鼠。分別于0日齡、20日齡、40日齡三個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組隨機(jī)抽取仔鼠10只，測(cè)量并記錄體重、身長、尾長，處死后獲取下丘腦組織，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定GHSR mRN

8、A、免疫組織化學(xué)法測(cè)定GItSR蛋白在各組仔鼠下丘腦中的表達(dá)，比較0日齡限食組SGA、限食組AGA和正常對(duì)照組AGA仔鼠之間，以及20日齡和40日齡SGA未追趕生長仔鼠、SGA追趕生長仔鼠和正常對(duì)照組AGA仔鼠之間是否存在差異。 結(jié)果：0日齡限食組SGA仔鼠下丘腦GHSR mRNA的表達(dá)低于限食組AGA和對(duì)照組AGA仔鼠(p<0.05)；20日齡SGA追趕生長仔鼠下丘腦GHSR mRNA的表達(dá)高于SGA未追趕生長仔鼠和正常對(duì)照組

9、AGA仔鼠(p<0.05)；40日齡時(shí)SGA.未追趕生長仔鼠、SGA追趕生長仔鼠和對(duì)照組AGA仔鼠之間下丘腦GHSR mRNA的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。0日齡限食組SGA、限食組AGA和對(duì)照組AGA仔鼠下丘腦中GHSR免疫陽性細(xì)胞的IOD值無顯著性差異(p>0.05)；20日齡SGA追趕生長仔鼠下丘腦中GHSR免疫陽性細(xì)胞的IOD值高于SGA未追趕生長仔鼠和正常對(duì)照組AGA仔鼠(p<0.05)；40日齡時(shí)SGA未追趕生長、

10、SGA追趕生長和對(duì)照組AGA仔鼠之間下丘腦GItSR免疫陽性細(xì)胞的IOD值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 結(jié)論：限食組母鼠在妊娠期能量攝入不足使胎鼠下丘腦GHSR細(xì)胞發(fā)育受到影響，可能是導(dǎo)致新生SGA仔鼠GHSR基因表達(dá)下降的原因。出生后經(jīng)過一段時(shí)間的生長和發(fā)育，部分SGA仔鼠下丘腦中GHSR的表達(dá)可得到恢復(fù)，且可能參與了SGA出生后的追趕生長過程。Ghrelin-GHSR．系統(tǒng)調(diào)控體格生長，促進(jìn)追趕生長的重要階段應(yīng)該是在青