肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體c-MET在大鼠胰腺發(fā)育中的表達(dá).pdf

1、運(yùn)用高密度寡核苷酸芯片建立大鼠胰腺發(fā)育不同階段(胚胎(E)12.5，E15.5，E18.5，新生和成年)的基因表達(dá)譜，經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)許多與胰腺功能相關(guān)的基因在E18.5相對(duì)高表達(dá)，提示胚胎發(fā)育后期胰腺功能正趨于完善和成熟，這個(gè)時(shí)期是形成典型胰腺結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵階段，而胰腺結(jié)構(gòu)是胰腺發(fā)揮正常生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。本研究從基因表達(dá)譜中篩選出c-met原癌基因在E18.5特異性高表達(dá)，旨在初步探討該基因及其表達(dá)產(chǎn)物c-MET蛋白在胰腺發(fā)育不

2、同階段的表達(dá)及細(xì)胞組織學(xué)定位。為進(jìn)一步揭示c-MET對(duì)胰腺發(fā)育的調(diào)控作用提供試驗(yàn)室數(shù)據(jù)。 運(yùn)用RT-PCR技術(shù)對(duì)大鼠胰腺發(fā)育基因芯片中c-met基因檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證(芯片所設(shè)計(jì)探針位于各條基因3’端非編碼區(qū))，同時(shí)針對(duì)c-met基因5’端編碼區(qū)設(shè)計(jì)引物，用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)c-met基因在胰腺發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)。兩次RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：(1)引物設(shè)計(jì)與基因芯片探針設(shè)計(jì)所用c-met基因區(qū)域一致時(shí)，RT-PCR表達(dá)趨勢(shì)與基因

3、芯片檢測(cè)結(jié)果相同；(2)引物設(shè)計(jì)與基因芯片探針設(shè)計(jì)所用c-met基因區(qū)域不一致時(shí)：在胰腺胚胎發(fā)育時(shí)期c-met的表達(dá)趨勢(shì)反向，而在新生后至成年時(shí)期表達(dá)趨勢(shì)趨于一致。分別用蛋白免疫印跡及免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)c-MET蛋白在大鼠胰腺發(fā)育不同階段(胚胎(E)12.5、E15.5、E18.5、新生后1天、生后14天、生后21天和成年)的表達(dá)及細(xì)胞組織學(xué)定位。結(jié)果顯示：c-MET在大鼠胰腺發(fā)育E18.5天開(kāi)始出現(xiàn)表達(dá)，新生后升高，生后21天最高，

4、表達(dá)量較E18.5天升高近50倍，成年表達(dá)量下降。同時(shí)，c-MET在胰腺發(fā)育不同階段表達(dá)不同的蛋白亞型：胚胎及成年期分別表現(xiàn)兩個(gè)不同的亞型(190KD，170KD)；生后14、21天兩個(gè)亞型都存在。c-MET蛋白在胰腺的細(xì)胞組織學(xué)定位隨著胰腺發(fā)育階段的變化而變化：胚胎期主要定位在胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞；生后14天除胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞外，胰島也有少量散在陽(yáng)性細(xì)胞；生后21天胰島中c-MET陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)較胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞多；成年c-MET又定位在

5、胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞及少量胰島細(xì)胞。基于以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，c-met原癌基因mRNA的不同表達(dá)趨勢(shì)預(yù)示該基因存在不同轉(zhuǎn)錄本，在胰腺發(fā)育不同階段的出現(xiàn)c-MET蛋白不同亞型的表達(dá)，也與該蛋白已報(bào)道的兩種不同亞型相符。胚胎和成年胰腺分別表達(dá)190KD和170KD的兩種亞型，此時(shí)蛋白定位于胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞。c-MET在新生胰腺顯著、特異性高表達(dá)，定位于胰島細(xì)胞和導(dǎo)管上皮細(xì)胞；生后胰腺結(jié)構(gòu)重塑階段，c-MET兩種蛋白亞型的顯著、特異性高表達(dá)提示：c-M