內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過下調(diào)C-Met表達(dá)抑制人肝細(xì)胞株L細(xì)胞生長和增殖.pdf

1、目的：人體肝臟有很強的再生能力，在多數(shù)病理條件下能通過肝再生修復(fù)肝組織損傷，肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)通過與其受體c-Met結(jié)合促進(jìn)肝細(xì)胞增殖是肝再生過程中的重要環(huán)節(jié)。近幾年的研究提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmicreticulum stress，ER stress)是存在于多種肝臟疾病的一種病理狀態(tài)，但對ER stress對肝細(xì)胞生長、增殖的影響及機制尚不清楚。本研究的目的是探討ER

2、 stress對肝細(xì)胞生長、增殖的影響及機制。
　　 方法：1、以人正常肝細(xì)胞株LO2為研究對象，用2μM毒胡蘿卜素(thapsigargin，TG)誘導(dǎo)ER stress，用4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid，PBA)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，用蛋白免疫印跡方法(western blotting，WB)檢測葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucoseregulated protein78，GRP78)的表達(dá)以判斷ER st

3、ress；2、ER stress對LO2細(xì)胞生長增殖及HGF刺激的影響。用TG誘導(dǎo)肝細(xì)胞ER stress，觀察肝細(xì)胞生長和增殖改變，進(jìn)一步觀察PBA抑制ER stress及HGF刺激后肝細(xì)胞生長和增殖改變。采用四甲基偶氮唑鹽[3-(4，5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3，5-di-phenytetrazoliumromid，MTT]、TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeli

4、ng)法分別檢測不同時間點細(xì)胞增殖率及凋亡率；3、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對LO2細(xì)胞HGF受體c-Met表達(dá)的影響。用TG誘導(dǎo)肝細(xì)胞ER stress，并用PBA干預(yù)，用WB法檢測不同時間肝細(xì)胞內(nèi)c-Met表達(dá)，用反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測c-Met mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：1、LO2細(xì)胞經(jīng)2μM TG誘導(dǎo)6h后GRP78表達(dá)逐漸增強，

5、36h達(dá)到高峰，PBA后可部分減弱TG對GRP78的誘導(dǎo)；2、2μM TG處理24h后LO2細(xì)胞生長、增殖受到明顯抑制，與正常對照組比較有顯著意義(P<0.05)，而細(xì)胞凋亡指數(shù)在36h內(nèi)與正常對照組比較無明顯增加，PBA可部分減輕TG對肝細(xì)胞生長增殖的抑制作用。TG明顯降低LO2細(xì)胞對HGF刺激的敏感性，PBA可部分增加TG處理的LO2細(xì)胞對HGF刺激的敏感性；3、TG處理6h后LO2.細(xì)胞c-Met蛋白表達(dá)明顯下降，PBA可部分減弱