異基因骨髓單個(gè)核細(xì)胞移植治療1型糖尿病—NOD小鼠模式的建立.pdf

1、目的 建立異基因骨髓單個(gè)核細(xì)胞(MNC)移植治療1型糖尿病的動物模型。 方法 我們選擇28只NOD雌性小鼠(H一2<'g7>)，經(jīng)高脂飲食誘導(dǎo)，按隨機(jī)原則將15只成模NOD小鼠分為3組：(1)糖尿病單個(gè)核細(xì)胞移植l組(亞致死量照射組)：6只；(2)糖尿病單個(gè)核細(xì)胞移植2組(致死量照射組)：4只。(3)對照組(未進(jìn)行移植的糖尿病組)：5只。以C57BL/6雄性小鼠(H-2<'b>)20只為異基因骨髓單個(gè)核細(xì)胞移植的

2、供體。亞致死量組采用6~Co全身放射照射(TBI)750cGy進(jìn)行預(yù)處理；致死量組采用。<'60>Co全身放射照射(TBI)950cGy進(jìn)行預(yù)處理。照射后4～6小時(shí)，采集C57BL/6雄性小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞(MNC)由尾靜脈輸注給移植小鼠，每只小鼠移植骨髓單個(gè)核細(xì)胞數(shù)1～2×10<'6>個(gè)。移植后觀察NOD小鼠的血糖、體重、移植物抗宿主反應(yīng)(GVHD)及存活等指標(biāo)，并于移植后第3周，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測受者雌性NOD小鼠外周

3、血中Y染色體特異性基因表達(dá)，檢測移植植入指標(biāo)。 結(jié)果 1、28只NOD雌性小鼠有15只制成1型糖尿病小鼠模型，成模率為53.57％。2、亞致死量組移植6只小鼠4只成功植入，植入率66.67％(4/6)；致死量組移植的2只小鼠，2只均成功植入，植入率100％(2/2)。3、植入成功的6只小鼠均無腹瀉、弓背、脫毛等GVHD臨床癥狀，肝臟組織病理顯示無GVHD的表現(xiàn)。4、植入成功的亞致死量組4只小鼠血糖較移植前加重，體重明顯減

4、輕(F<0.05)，移植組與非移植組的血糖、體重比較無明顯差異(P>(0.05)，表明血糖和體重的變化可能與移植預(yù)處理或疾病的自然進(jìn)展有關(guān)。5、亞致死量組無移植相關(guān)死亡，致死劑量組2只小鼠在放射照射過程中死亡，移植相關(guān)死亡率50％(2/4)。 結(jié)論 1、我們成功建立異基因骨髓單個(gè)核細(xì)胞移植治療1型糖尿病NOD小鼠模式。2、亞致死量照射優(yōu)于致死量照射。3、異基因骨髓單個(gè)核細(xì)胞移植在1型糖尿病NOD小鼠中無明顯的GVHD。4