復(fù)榮通脈膠囊對(duì)糖尿病大鼠胸主動(dòng)脈eNOS、ADMA及NF-κB表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)觀察益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)的中藥復(fù)方制劑一復(fù)榮通脈膠囊對(duì)糖尿病大鼠eNOS、ADMA、NF-κB表達(dá)的影響，進(jìn)一步闡述其防治糖尿病血管病變的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:60只成年雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組，正常對(duì)照組10只，造模組50只。造模組大鼠禁食12h后，一次性腹腔注射STZ60mg/kg(STZ臨用前用0.1M檸檬酸鈉緩沖液配成濃度為1％、 pH=4.2的溶液)，正常組腹腔注射等量的檸檬酸鈉緩

2、沖液。72h后尾靜脈取血，測(cè)血糖≥16.7mmol/L，確定為糖尿病大鼠。成模后，隨機(jī)抽取40只分為糖尿病組（10只）及復(fù)榮通脈膠囊低劑量組（10只）、復(fù)榮通脈膠囊中劑量組(10只)、復(fù)榮通脈膠囊高劑量組（10只）。復(fù)榮通脈膠囊中劑量組給予1.4g/（kg體重）灌胃、復(fù)榮通脈膠囊低劑量組給予0.7g/（kg體重）灌胃、復(fù)榮通脈膠囊高劑量組給予2.8g/（kg體重）灌胃，其余兩組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃。實(shí)驗(yàn)期間，各組大鼠自由進(jìn)食水。

3、連續(xù)灌胃8周后，禁食12h以3％戊巴比妥(80mg/kg)腹腔注射麻醉，迅速開(kāi)腹，分離胸主動(dòng)脈從胸主動(dòng)脈采血，取2mL分離血清測(cè)定ADMA。留取胸主動(dòng)脈時(shí)，另留取一段以4％多聚甲醛固定，HE染色觀察形態(tài)學(xué)變化，SP法免疫組化染色觀察病理切片組織中陽(yáng)性染色面積及強(qiáng)度。計(jì)量資料均采用(X)±S表示，各組自身前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn);各組間比較采用單因素方差分析，方差不齊時(shí)應(yīng)用多個(gè)獨(dú)立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，所有數(shù)據(jù)用S

4、PSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)處理，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1、對(duì)大鼠一般狀態(tài)的影響糖尿病組及復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量治療組大鼠精神狀態(tài)差，飲水量增多，尿量增多，毛色晦暗無(wú)光澤，反應(yīng)遲鈍，抱團(tuán)少動(dòng)。
　　2、對(duì)血糖的影響治療前，與正常對(duì)照組相比，糖尿病組、復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組血糖明顯升高(P＜0.05);治療前，糖尿病組、復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組間相比血糖無(wú)明顯差異（P＞0.05）。治療后，與正常

5、對(duì)照組相比，糖尿病組、復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組血糖明顯升高(P＜0.05);治療后，糖尿病組、復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組間相比血糖無(wú)明顯差異(P＞0.05)。各組大鼠治療前后血糖無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　3、對(duì)膽固醇、甘油三酯的影響灌胃治療8周后，與正常對(duì)照組相比，糖尿病組、復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量治療組膽固醇明顯升高(P＜0.05);糖尿病組與復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組組間相比膽固醇無(wú)明顯差異(P＞0.05)。

6、治療后，與正常對(duì)照組相比，糖尿病組、復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量治療組甘油三酯明顯升高（P＜0.05）;糖尿病組與復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組組間相比甘油三酯無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　4、對(duì)血管組織形態(tài)學(xué)的影響光鏡下觀察HE染色后各組大鼠胸主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)改變:正常對(duì)照組血管形態(tài)正常，內(nèi)皮細(xì)胞排列緊密，內(nèi)膜完整，未見(jiàn)炎性細(xì)胞及不定形物質(zhì)沉積;糖尿病組可見(jiàn)動(dòng)脈內(nèi)膜增厚，內(nèi)膜斷裂不完整，部分內(nèi)膜向腔內(nèi)突起，可見(jiàn)泡沫細(xì)胞，中膜可見(jiàn)較多

7、大小不等的裂隙，平滑肌細(xì)胞排列紊亂;復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量治療組胸主動(dòng)脈形態(tài)介于正常對(duì)照組與糖尿病組之間，低劑量治療組光鏡下可見(jiàn)動(dòng)脈內(nèi)膜增厚，部分內(nèi)皮細(xì)胞脫落消失，偶可見(jiàn)泡沫細(xì)胞;復(fù)榮通脈膠囊中、高劑量治療組光鏡下無(wú)明顯差別，內(nèi)膜較完整，偶見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞脫落。
　　5、對(duì)血清ADMA的影響灌胃治療8周后，與正常對(duì)照組相比，糖尿病組及復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組血清ADMA明顯升高(P＜0.05);與糖尿病組相比，復(fù)榮通脈膠囊低、中

8、、高劑量組血清ADMA明顯降低(P＜0.05);與復(fù)榮通脈膠囊低劑量組相比，復(fù)榮通脈膠囊中、高劑量組血清ADMA水平明顯降低（P＜0.05）;復(fù)榮通脈膠囊中劑量組與高劑量組間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　6、對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈NF-κB表達(dá)的影響灌胃治療8周后，與正常對(duì)照組相比，糖尿病組及復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組NF-κB表達(dá)明顯升高(P＜0.05);與糖尿病組相比，復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組NF-κB表達(dá)明顯降低(P＜0.

9、05);與復(fù)榮通脈膠囊低劑量組相比，復(fù)榮通脈膠囊中、高劑量組NF-κB表達(dá)明顯降低(P＜0.05);復(fù)榮通脈膠囊中劑量組與高劑量組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　7、對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈eNOS表達(dá)的影響灌胃治療8周后，與正常對(duì)照組相比，糖尿病組及復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組eNOS表達(dá)明顯降低(P＜0.05);與糖尿病組相比，復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組eNOS表達(dá)明顯升高(P＜0.05);與復(fù)榮通脈膠囊低劑量組相比，復(fù)榮通脈膠

10、囊中、高劑量組eNOS表達(dá)明顯升高(P＜0.05);復(fù)榮通脈膠囊中劑量組、高劑量組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、大鼠中NF-κB表達(dá)強(qiáng)弱及ADMA水平與胸主動(dòng)脈病理變化相一致，eNOS表達(dá)強(qiáng)弱與胸主動(dòng)脈病理變化相反，提示糖尿病血管病變的發(fā)生發(fā)展中，eNOS、ADMA和NF-κB均起重要作用。
　　2、DM大鼠胸主動(dòng)脈中NF-κB表達(dá)增強(qiáng)而eNOS表達(dá)降低，血清ADMA水平升高，提示糖尿病血管病變

11、中，NF-κB和ADMA可能存在相互作用，NF-κB和eNOS之間可能存在相互拮抗。
　　3、復(fù)榮通脈膠囊各治療組大鼠胸主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)均較DM組改善，提示復(fù)榮通脈膠囊對(duì)血管組織具有保護(hù)作用，對(duì)糖尿病大血管病變有一定治療作用。
　　4、復(fù)榮通脈膠囊各治療組大鼠與DM組比較，血清ADMA水平及NF-κB表達(dá)降低，eNOS表達(dá)增強(qiáng)，提示復(fù)榮通脈膠囊可降低血清ADMA水平，抑制NF-κB、促進(jìn)eNOS在大鼠胸主動(dòng)脈的表達(dá)。