清熱祛濁膠囊對(duì)2型糖尿病大鼠胰島素抵抗及胸主動(dòng)脈內(nèi)皮功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察清熱祛濁膠囊對(duì)2型糖尿病大鼠血清NO、 ET-1水平，胰島素抵抗指數(shù)(HOMA－IR)，胸主動(dòng)脈 t-PA、PAI-1表達(dá)，研究其對(duì)大血管病變影響及胰島素抵抗影響，為指導(dǎo)臨床治療2型糖尿病及糖尿病性周圍血管病變提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。
　　方法：將49只成年雄性健康Wistar大鼠，體重約220左右，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,隨機(jī)抽樣6只預(yù)實(shí)驗(yàn)，剩余43只隨機(jī)抽樣，用隨機(jī)數(shù)字表選8只為空白對(duì)照組，余35只為造模組?？瞻讓?duì)照組大鼠常規(guī)飼料

2、喂養(yǎng)，腹腔注射與造模組煙酰胺（NA）溶液等量的生理鹽水；造模組喂養(yǎng)高脂飼料，聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射，制備T2DM大鼠模型。造模組向腹腔注射NA溶液（260mg/Kg），15分鐘后，尾靜脈注射STZ（STZ溶于0.1mmol/L檸檬酸緩沖液中，PH4.5）40mg/kg，之后三天予VD3注射液（60萬(wàn)IU/kg）灌胃，并喂養(yǎng)高脂高膽固醇飼料（3％膽固醇，0.5%膽酸鈉，0.2%丙硫氧嘧啶，5%糖，10%豬油，81.3%基礎(chǔ)

3、飼料），喂飼8周。同時(shí)各治療組大鼠分別按不同藥物、不同劑量灌胃相應(yīng)藥物。成模后（剩余32只），隨機(jī)抽取32只分為模型組（8只）及清熱祛濁膠囊組（8只）、清熱祛濁膠囊+二甲雙胍組（8只）、二甲雙胍組（8只）。清熱祛濁膠囊組給予（1.0g藥粉/kg/d）灌胃，西藥二甲雙胍對(duì)照組給予二甲雙胍25mg/kg/d(相當(dāng)于成人1500mg/d)，灌胃，每日1次。清熱祛濁膠囊+二甲雙胍組給予二甲雙胍25mg/kg/d(相當(dāng)于成人1500mg/d)+（

4、1.0g藥粉/kg/d）灌胃，每日1次。正常組及糖尿病組予同等劑量純凈水灌胃，每日1次。大鼠藥物喂養(yǎng)8周完成后，開(kāi)始禁食，進(jìn)食時(shí)間12h，準(zhǔn)備解剖臺(tái)及所需器械。抽取3％戊巴比妥（80mg/kg）液注射進(jìn)大鼠腹腔，進(jìn)行麻醉，大鼠癱軟不能活動(dòng)后，迅速剖開(kāi)腹腔，分離腹主動(dòng)脈，從腹主動(dòng)脈處采血，取血液2 Ml，迅速放入離心機(jī)，分離血漿后，加入相應(yīng)檢測(cè)液，測(cè)定ET-1、NO、胰島素、C肽。大鼠取血后，迅速解剖胸腔，分離胸主動(dòng)脈，留取約2cm，迅速

5、放入4%中性福爾馬林溶液中固定，做好標(biāo)記，準(zhǔn)備檢測(cè) PAI-1、t PA（免疫組化法）。觀察標(biāo)本細(xì)胞漿內(nèi)和（或）細(xì)胞膜內(nèi)棕黃色顆粒所占鏡下面積及細(xì)胞數(shù)比例，比較PAI-1、t-PA的染色陽(yáng)性表達(dá)。計(jì)量資料均：x±S表示；自身前后比較：t檢驗(yàn)；方差不齊，采用 Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)；數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0處理，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1大鼠一般狀態(tài)比較
　　分配到正常組的大鼠毛色潔白順滑，

6、精神良好，反應(yīng)靈敏，活潑好動(dòng)，正常飲水、進(jìn)食如常，分配到各組的糖尿病大鼠，毛色萎蔫，精神較差，反應(yīng)呆板，飲水量增多及進(jìn)食量增多。
　　2血糖分析
　　造模前：
　　各組血糖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　造模后：
　　治療前與 NC組相比Met、QRC、Met+QRC組大鼠血糖均顯著升高（P<0.05），DM組及Met、QRC、Met+QRC組間血糖比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　治療后與

7、 NC組相比Met、QRC、Met+QRC組大鼠血糖，均顯著升高（P<0.05）；DM組與QRC組、Met組、Met+QRC組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），Met+QRC與Met組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；QRC組與Met組、Met+QRC有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；QRC組血糖與治療前相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。Met組、Met+QRC組血糖與治療前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　3對(duì)大鼠胰島素抵抗指數(shù)

8、（HOMA－IR)影響：
　　灌胃治療后，與 NC組比較Met組、QRC組、Met+QRC組大鼠血清HOMA－IR水平明顯升高（P<0.05）。與 DM組比較，Met組、QRC組、Met+QRC組HOMA－IR水平明顯下降（P<0.05）。Met組、Met+QRC組之間大鼠血清HOMA－IR水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。與Met組比較QRC組HOMA－IR水平無(wú)明顯升高（P>0.05）。
　　4大鼠血清 ET-1水平比較

9、
　　灌胃治療后，與 NC組比較Met組、QRC組、Met+QRC組大鼠血清 ET-1水平明顯升高（P<0.05）。與 DM組比較，Met組、QRC組Met+QRC組ET-1水平明顯下降（P<0.05）。Met組、QRC組Met+QRC之間大鼠血清 ET-1水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　5大鼠血清 NO水比較
　　灌胃治療后，與 NC組比較，DM組、Met組、QRC組、Met+QRC組血清 NO水平明顯下降（

10、P<0.05）。與 DM組比較，Met組、QRC組、Met+QRC組 NO水平明顯升高（P<0.05）。Met組、QRC組、Met+QRC組之間大鼠血清 NO水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　6大鼠胸主動(dòng)脈 PAI-1表達(dá)比較
　　與 NC相比較，DM組、Met組、QRC組、Met+QRC組大鼠動(dòng)脈中表達(dá)明顯增多（P<0.05）。與 DM組相比，Met組、QRC組、Met+QRC組表達(dá)明顯減少（P<0.05）。Met組

11、、QRC組、Met+QRC組之間表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　7大鼠胸主動(dòng)脈 t-PA表達(dá)比較
　　與 NC組相比，DM組、Met組、QRC組、Met+QRC組大鼠動(dòng)脈中表達(dá)明顯減少（P<0.05）。與 DM組相比，Met組、QRC組、Met+QRC組表達(dá)明顯增多（P<0.05）。S Met組、QRC組、Met+QRC組之間表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　8大鼠動(dòng)脈組織觀察比較
　　NC組內(nèi)膜內(nèi)

12、皮細(xì)胞緊密，呈現(xiàn)密度高，分布連續(xù)的特點(diǎn)，細(xì)胞間隙狹窄，排列規(guī)律；中膜平滑肌細(xì)胞排列緊密規(guī)律，胞漿淺染，外膜正常；DM組內(nèi)皮細(xì)胞表面排列不規(guī)律，可見(jiàn)較多隆起，分布于中膜層的平滑肌細(xì)胞較正常組增多、排列不規(guī)律，且結(jié)構(gòu)紊亂；Met組、QRC組、Met+QRC組內(nèi)皮細(xì)胞連接較緊密但不如NC組，內(nèi)皮下間隙窄，介于NC組與DM組之間，中膜平滑肌細(xì)胞增殖減少，介于NC組與DM組之間，內(nèi)皮細(xì)胞表面排列紊亂明顯改善。Met組、QRC組、Met+QRC組比

13、較無(wú)差異。
　　9藥物副作用情況比較
　　與 NC組相比，Met組、QRC組、Met+QRC組大鼠均有輕度腹瀉，三組之間腹瀉程度相似，未見(jiàn)其他不適反應(yīng)，Met+QRC組藥物不適反應(yīng)未較Met組、QRC組增加。
　　結(jié)論：
　　1與DM組比較清熱祛濁膠囊可降低胰島素抵抗指數(shù)（HOMA－IR)
　　2清熱祛濁膠囊可降低血清 ET-1、升高血清 NO水平。
　　3清熱祛濁膠囊可抑制2型糖尿病大鼠 PAI-1