雙歧桿菌灌胃對(duì)5-Fu腹腔注射大鼠腸屏障功能的影響.pdf

1、目的:1.觀察5-Fu腹腔注射對(duì)SD大鼠小腸結(jié)構(gòu)及腸屏障功能的影響,比較一次性給藥和分次連續(xù)給藥方案對(duì)小腸粘膜的損傷作用;2.探討長(zhǎng)雙歧桿菌對(duì)5-Fu引起的大鼠腸屏障功能損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。方法:SD大鼠72只隨機(jī)分為6組,每組12只。對(duì)照組(A)、小劑量5-Fu組(B)、小劑量5-Fu聯(lián)合雙歧桿菌組(C);對(duì)照組(D)、大劑量5-Fu組(E)、大劑量5-Fu聯(lián)合雙歧桿菌組(F)。B組、C組每天腹腔注射5-Fu40mg/kg D1-5

2、天,A組注射等比例生理鹽水;C組每天予雙歧桿菌溶解液1ml灌胃(含長(zhǎng)雙歧桿菌1×1010cfu/ml)D1-7天,A組、B組等容積生理鹽水灌胃。E組、F組腹腔注射5-Fu500mg/kg D1天,D組注射等容積生理鹽水;F組每天予雙歧桿菌溶解液1ml灌胃(含長(zhǎng)雙歧桿菌1×1010cfu/ml)D1-7天,D組、E組等容積生理鹽水灌胃。實(shí)驗(yàn)中觀察動(dòng)物體重變化并對(duì)腹瀉情況進(jìn)行評(píng)分。于實(shí)驗(yàn)第四天和第八天處死每組各6只動(dòng)物,活體取小腸組織觀察腸

3、粘膜病理學(xué)變化,采用免疫組化方法測(cè)定小腸粘膜occludin蛋白、sIgA、PCNA表達(dá)。結(jié)果:1.各實(shí)驗(yàn)組大鼠體重變化實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)照組A對(duì)照組D體重進(jìn)行性增加,增加量差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)第四天B組、C組、E組、F組體重明顯下降,與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05),C組體重下降小于另外三組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)第八天B組、C組、E組、F組大鼠體重進(jìn)一步下降,F組體重下降明顯少于其他三組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0

4、5)。2.各實(shí)驗(yàn)組大鼠腹瀉情況實(shí)驗(yàn)第4天,E組腹瀉程度最嚴(yán)重,C組好于B組,F組好于E組,B組好于E組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P,0.01;F組C組之間無差別。實(shí)驗(yàn)第8天,B組腹瀉程度最嚴(yán)重,C組好于B組,F組好于E組,E組好于B組,F組好于C組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P,0.01。3.各實(shí)驗(yàn)組大鼠病理評(píng)分實(shí)驗(yàn)第4天,E組病理評(píng)分最差,C組好于B組,F組好于E組,B組好于E組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P,0.01;F組C組之間無差別。實(shí)驗(yàn)第8天,B組

5、病理評(píng)分最差,C組好于B組,F組好于E組,E組好于B組,F組好于C組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P,0.01。4.各實(shí)驗(yàn)組大鼠PCNA、Occludin蛋白、sIgA表達(dá)情況B組、C組實(shí)驗(yàn)第4天occludin蛋白、sIgA表達(dá)下降,PCNA表達(dá)上升，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。C組occludin蛋白、sIgA、PCNA表達(dá)較B組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。實(shí)驗(yàn)第8天occludin蛋白、sIgA表達(dá)進(jìn)一步下降,PCN

6、A表達(dá)下降, C組occludin蛋白、sIgA較B組高,PCNA表達(dá)較B組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。E組、F組實(shí)驗(yàn)第4天occludin蛋白、sIgA表達(dá)下降,PCNA表達(dá)上升，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。F組occludin蛋白、sIgA、PCNA表達(dá)較E組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。實(shí)驗(yàn)第8天occludin蛋白、sIgA表達(dá)有所上升，但仍低于對(duì)照組,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。P

7、CNA表達(dá)下降但仍高于對(duì)照組,E組與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。F組occludin蛋白、sIgA較E組高,PCNA表達(dá)較E組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。B組與E組,C組與F組之間,實(shí)驗(yàn)第4天occludin蛋白、sIgA、PCNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,實(shí)驗(yàn)第8天E組、F組occludin蛋白、sIgA、PCNA表達(dá)均高于B組、C組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。結(jié)論:1.腹腔注射5-Fu能成功建立大鼠小腸黏膜損

8、傷-修復(fù)模型,大鼠表現(xiàn)出腹瀉次數(shù)和腹瀉量的增加及相應(yīng)的體重下降,小腸形態(tài)學(xué)改變表現(xiàn)為絨毛壞死,隱窩消失,腸屏障功能改變表現(xiàn)為機(jī)械屏障功能受損(腸黏膜Occludin蛋白表達(dá)減少)、腸免疫屏障受損(腸黏膜sIgA含量下降),同時(shí)腸上皮再生修復(fù)能力下降(PCNA含量下降)。5-Fu500mg/kg一次性腹腔注射大鼠在停藥1周后腸粘膜損傷可以逐步修復(fù)。大鼠5-Fu腹腔注射連續(xù)五天的給藥方式較一次性給藥方式所造成的腸粘膜損傷更為嚴(yán)重。2.長(zhǎng)雙歧