雙歧桿菌、酪酸梭菌及谷氨酰胺對慢性應激模型小鼠腸黏膜屏障的影響.pdf

1、背景和目的：
　　應激對胃腸道功能有近期和長期的影響。應激引起腦腸相互作用的改變最終導致一系列胃腸道疾病，包括炎癥性腸病、腸易激綜合征和其他功能性胃腸病、食物抗原相關的不良反應、消化性潰瘍和胃食管反流病。
　　細胞間緊密連接是構成腸道物理屏障的決定因素，其是圍繞在上皮細胞頂膜側的多蛋白復合體，調節(jié)離子、溶質和水的細胞旁轉運。已經(jīng)確定的有Occludin、Claudins、JAM和Tricellulin。這些跨膜蛋白與細胞內斑

2、塊蛋白質相連接，如ZO和Cingluin。大量證據(jù)表明，腸黏膜屏障缺陷參與數(shù)種腸道疾病的發(fā)病，如炎癥性腸病、食物過敏癥和酒精性肝病。然而，這些疾病和腸黏膜屏障缺陷的因果關系，以及引起腸黏膜屏障缺陷的具體機制仍不明確。
　　谷氨酰胺是小腸細胞代謝的主要能源。體內研究表明，谷氨酰胺有助于維持腸道黏膜的完整性，特別是在應激狀態(tài)下，比如放射治療、化療及全胃腸外營養(yǎng)。谷氨酰胺可以調節(jié)腸屏障功能，其對于腸黏膜屏障損傷相關疾病的治療和預防有潛在

3、的研究和應用價值。在體內和體外，益生菌均可改善腸黏膜屏障的完整性，緩解應激大鼠的腸上皮屏障障礙。嬰兒雙歧桿菌Y1的代謝產(chǎn)物干預T84單層細胞出現(xiàn)ZO-1表達增多，同時Occludin蛋白表達增加和Claudin-2表達減少，表明益生菌產(chǎn)物具有調節(jié)緊密連接的離子通透性的能力。在本實驗中，我們采用避水壓力實驗誘導小鼠慢性應激模型，用雙歧桿菌、酪酸梭菌和谷氨酰胺干預小鼠，觀察它們對小鼠腸通透性的影響及對腸黏膜屏障緊密連接蛋白ZO-1、Occl

4、udin表達的調節(jié)作用。通過本研究有望進一步闡明應激導致腸黏膜屏障功能障礙的確切機制并為益生菌和谷氨酰胺治療應激性疾病提供理論依據(jù)。
　　材料和方法：
　　60只Balb/c小鼠隨機分為6組:正常對照組、模型對照組、雙歧桿菌干預組、酪酸梭菌干預組、谷氨酰胺干預組、雙歧桿菌+谷氨酰胺共同干預組。采用WAS（water avoidance strss）實驗構建小鼠慢性應激模型。用ELISA法測定小鼠血漿D-乳酸(D-LA)、二胺

5、氧化酶(DAO)濃度，評價小鼠腸道通透性;RT-PCR法檢測小鼠小腸、結腸組織中ZO-1、Occludin的mRNA表達;Western blot法檢測小鼠小腸、結腸組織中ZO-1、Occludin蛋白的表達。
　　結果：
　　1.模型組小鼠血漿D-乳酸、DAO濃度明顯高于正常組小鼠（均P＜0.05），雙歧桿菌、酪酸梭菌、谷氨酰胺及聯(lián)合干預后，小鼠血漿D-乳酸、DAO濃度較模型組有明顯下降（均P＜0.05），聯(lián)合組下降最顯著

6、，與雙歧桿菌、酪酸梭菌、谷氨酰胺相比有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。
　　2.雙歧桿菌、酪酸梭菌、谷氨酰胺及聯(lián)合干預后小鼠小腸緊密連接蛋白ZO-1、Occludin在mRNA水平較模型組的表達升高（均P＜0.05），結腸緊密連接蛋白ZO-1、Occludin在mRNA水平較模型組的表達升高（均P＜0.05）。
　　3.雙歧桿菌、酪酸梭菌、谷氨酰胺及聯(lián)合干預后小鼠小腸緊密連接蛋白ZO-1、Occludin在蛋白質水平較模型組表

7、達升高（均P＜0.05），結腸緊密連接蛋白ZO-1、Occludin在蛋白質水平較模型組表達升高（均P＜0.05）。
　　結論：
　　1.小鼠處于慢性應激環(huán)境時，腸道通透性升高。雙歧桿菌、酪酸梭菌和谷氨酰胺可以緩解慢性應激導致的小鼠腸道通透性增高，雙歧桿菌和谷氨酰胺之間存在協(xié)同作用。
　　2.小鼠處于慢性應激環(huán)境時，腸道機械屏障損傷。雙歧桿菌、酪酸梭菌和谷氨酰胺可以緩解慢性應激導致的小鼠腸道機械屏障的損傷，且雙歧桿菌和