谷氨酰胺對膿毒癥小鼠氧化應激損傷的保護作用研究.pdf

1、目的:探討谷氨酰胺是否可以減少膿毒癥小鼠的氧化應激損傷，在危重癥疾病氧化應激狀態(tài)下發(fā)揮保護作用。
　　方法:
　　1.動物分組與造模方法:
　　5周齡雄性昆明小鼠30只，利用隨機數字表，采取完全隨機方法將其平均分為三組，每組10只，分別設為對照組，（control，C組）、內毒素組(LPS，L組)、谷氨酰胺組（Gln，G組）。
　　內毒素組與谷氨酰胺組采用腹腔注射內毒素的方法制造膿毒癥動物模型，內毒素的注射劑量為

2、5ml/kg。對照組腹腔注射等量生理鹽水。造模成功后，谷氨酰胺組即刻尾靜脈注射丙氨酰谷氨酰胺注射液，注射劑量為0.75g/kg。內毒素組尾靜脈注射等量無菌生理鹽水作為陽性對照，對照組尾靜脈注射等量生理鹽水作為陰性對照。6小時后終止實驗，眼眶取血后采用頸椎脫臼法處死動物，解剖分離動物肝、腎組織，迅速液氮冷凍。動物血低溫放置，待血清析出后離心，取血清，液氮冷凍待測。
　　2.氧化應激指標的測定方法:
　　每次測試樣品前先將樣品從

3、液氮中取出在4℃冰箱中解凍。取動物組織塊在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，準確稱重0.3g，放入勻漿管中，按重量(g)∶體積(ml)=1∶9的比例加入9倍體積的勻漿介質（生理鹽水2.7ml）于勻漿管中，冰水浴條件下，用眼科小剪盡快剪碎組織塊。將玻璃勻漿管置于冰水浴條件下，手動勻漿，30秒/次，間隔30秒，重復6～8次，制成10％的勻漿液。將制備好的10％勻漿液用普通離心機2500轉/分，離心15分鐘，取上清液進行測定。部分10

4、％的勻漿液用生理鹽水按體積比1∶9稀釋成1％的組織勻漿待測。為達到實驗結果穩(wěn)定性，制備好的勻漿液都在在制備當天進行測定。
　　取3組小鼠血清、肝、腎組織勻漿進行氧化應激指標谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px(glutathion peroxidase)、超氧化酶歧化酶SOD(superoxide dismutase)、丙二醛MDA(malonaldehyde)的測量。具體的測量方法按試劑盒說明書進行操作。
　　3.數據統(tǒng)計方法:

5、
　　數據的收集與錄入使用Excel2003，數據的描述與分析使用SPSS16.0。首先對各組進行正態(tài)性與方差齊性檢驗，如果獨立樣本的數據服從正態(tài)性與方差齊性，采取參數檢驗方法進行假設檢驗。兩獨立樣本的比較取用完全獨立樣本比較的t檢驗，三個獨立樣本的比較采用完全獨立多樣本比較的單因素方差分析。進一步的兩兩比較采用SNK-q法進行。如果資料不服從正態(tài)性與方差齊性，則采用多個獨立樣本比較的Kruskal-Wallis H非參數檢驗，進

6、一步的兩兩比較采用秩轉換的方差分析。檢驗水準α=0.05，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1.谷氨酰胺組的小鼠血清、肝臟和腎臟中的GSH-Px、SOD水平均高于內毒素組，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　2.谷氨酰胺組的小鼠血清、肝臟和腎臟中的MDA水平低于內毒素組，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結論:膿毒癥造成氧化應激與氧化損傷，使用谷氨酰胺可以提高抗氧化酶GSH-Px、SOD的水平，增強抗氧化能力。減