基于金、銀納米材料的新型免疫學(xué)檢測技術(shù)的建立與評(píng)價(jià).pdf

1、目的：利用制備的金、銀納米材料，建立簡便、快速的高靈敏免疫學(xué)檢測方法，摸索可產(chǎn)業(yè)化的生產(chǎn)工藝，為新型快速檢測技術(shù)的設(shè)計(jì)和開發(fā)提供方法學(xué)基礎(chǔ)。
　　方法：利用制備的金納米顆粒和熒光材料建立新型的熒光猝滅免疫層析試紙條（fluorescence quenching immunochromatographic strip，F(xiàn)Q-ICS）用于重金屬鎘離子（cadmium，Cd2+）的檢測，并對(duì)其生產(chǎn)工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)為了簡化FQ-IC

2、S結(jié)果讀取方式，制作低成本的基于手機(jī)聯(lián)用的便攜式試紙條讀卡儀，并對(duì)其穩(wěn)定性和可用性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。利用制備的銀納米顆粒偶聯(lián)拉曼探針4-MBA并表面增強(qiáng)其拉曼信號(hào)，將該復(fù)合物標(biāo)記抗體，建立基于銀納米顆粒表面增強(qiáng)拉曼光譜的免疫層析試紙條（Surface Enhanced Raman Scattering-based ICS，SERS-ICS）用于水樣中的重金屬鉻離子（chromium，Cr3+）的檢測，將檢測結(jié)果與電感耦合等離子體質(zhì)譜（indu

3、ctively coupled plasma mass spectrometry，ICP-MS）進(jìn)行符合性比較，同時(shí)對(duì)試紙條的特異性和重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。利用在 SERS-ICS構(gòu)建的過程中發(fā)現(xiàn)的銀納米顆粒的氧化現(xiàn)象，優(yōu)化條件，建立基于聚集銀納米顆粒表面增強(qiáng)拉曼光譜的等離子體ELISA（SERS-plasmonic ELISA）方法，用于超靈敏檢測前列腺癌特異抗原（Prostatic sepcific antigen，PSA）和瘦肉精萊克多

4、巴胺（Ractopamine，Rac），將該方法檢測臨床血清樣本，并與時(shí)間分辨免疫熒光技術(shù)（Time Resolved Fluorescence Immunoassay，TRFIAs）的結(jié)果進(jìn)行比較。為了降低成本和方便肉眼觀察，利用制備的三角銀納米片材料，建立基于過氧化氫（H2O2）腐蝕三角銀納米片的等離子體ELISA（Triangular AgNPRs-plasmonic ELISA），用于高靈敏檢測PSA，并對(duì)該方法進(jìn)行可行性驗(yàn)證、

5、靈敏度和特異性評(píng)價(jià)，將該方法檢測臨床血清樣本，并與 TRFIAs的結(jié)果進(jìn)行比較。利用金納米顆粒的表面等離子共振現(xiàn)象，建立簡便的納米金-適配體的比色傳感器用于檢測PSA，初步優(yōu)化該方法的反應(yīng)條件后進(jìn)行靈敏度和特異性評(píng)價(jià)，并檢測臨床血清樣本，與 TRFIAs的結(jié)果進(jìn)行比較，同時(shí)制備了低成本的基于手機(jī)聯(lián)用的便攜式比色儀，并對(duì)其可用性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：建立了可檢測水樣中的Cd2+的FQ-ICS，檢測信號(hào)與Cd2+濃度呈正相關(guān)，靈敏度比

6、膠體金免疫層析試紙條高15倍以上，可檢測實(shí)際環(huán)境水樣，經(jīng)生產(chǎn)工藝優(yōu)化后，該試紙條可保存一年以上，且批間差異性不顯著。制作的便攜式讀卡設(shè)備對(duì)同一試紙條的拍照無明顯差異，且可用于膠體金試紙條和熒光的試紙條。建立的SERS-ICS檢測Cr3+靈敏度達(dá)到10-5ng/mL，線性范圍在10-6ng/mL-10-2ng/mL，特異性和重復(fù)性良好，檢測實(shí)際水樣，結(jié)果與ICP-MS的結(jié)果無顯著差異。建立的SERS-plasmonic ELISA檢測PS

7、A和Rac的靈敏度達(dá)到10-9ng/mL和10-6ng/mL，檢測臨床血清樣品中的PSA結(jié)果與TRFIAs結(jié)果無顯著差異。建立的Triangular AgNPRs-plasmonic ELISA檢測PSA靈敏度達(dá)到4.1fg/mL，線性范圍在1fg/mL-10-6fg/mL，可用肉眼觀察結(jié)果，特異性良好，檢測臨床血清樣品中的PSA結(jié)果與 TRFIAs結(jié)果無顯著差異。建立的納米金-適配體的比色傳感器檢測 PSA靈敏度為2ng/mL，線性范

8、圍在5ng/mL-20ng/mL，特異性良好，檢測臨床血清樣品中的PSA結(jié)果與TRFIAs結(jié)果無顯著差異。制作的便攜式比色儀對(duì)納米金-適配體的比色傳感器進(jìn)行結(jié)果的讀取，初步驗(yàn)證該方法可行。
　　結(jié)論：本研究建立了高靈敏正讀的FQ-ICS并優(yōu)化了其生產(chǎn)工藝流程，試紙條保存期長，批間差異小。制作的便攜式讀卡儀穩(wěn)定可靠，適合即時(shí)檢測和床旁診斷。建立了高靈敏、快速檢測 Cr3+的SERS-ICS，可檢測實(shí)際水樣。建立了超靈敏檢測 PSA和