多西他賽納米膠束和雷公藤有效部位口服制劑的研究.pdf

1、第一部分:
　　目的：多西他賽（docetaxel，DTX）為一種臨床常用抗癌藥，但其強疏水性給臨床使用帶來不便。為了克服多西他賽在水中溶解度低的缺點，合成了一種新的二嵌段聚合物作為藥物傳送載體。mPEG作為親水段，PLA作為疏水段，在水溶液中自組裝成具有殼-核結(jié)構(gòu)的聚合物膠束，多西他賽為模型藥物被包裹入疏水核心，達到增加其在水中溶解度的目的。
　　方法：實驗利用mPEG2000和DL-丙交酯在辛酸亞錫的催化作用下開環(huán)聚合成

2、mPEG-b-PDLLA二嵌段聚合物，通過核磁共振、MALDI-TOF-TOF-MS、臨界膠束濃度對聚合物進行表征。
　　采用薄膜水化法制備載多西他賽膠束（DTX-PM)，通過單因素考察確定最優(yōu)處方，并將最優(yōu)處方進行工藝重現(xiàn)性考察；利用透射電鏡觀察最優(yōu)條件下制備的載多西他賽納米膠束形態(tài)；分別用PSS-NICOMP粒徑測定儀和Malvern Nano ZS激光粒度分析儀測定其粒徑和分布；利用PSS-NICOMP粒徑測定儀測定Zeta

3、電位；高效液相色譜法（HPLC）測定包封率及載藥量；以累積釋藥百分率為指標(biāo)，通過擬合釋藥曲線，考察并比較市售多帕菲和DTX-PM的體外釋藥特性；通過眼眶取血的方法取豚鼠血液，比較市售制劑多帕菲和DTX-PM的溶血情況。
　　載多西他賽納米膠束的體外評價：通過細胞遷移試驗觀察空白膠束、市售多帕菲和DTX-PM對4T1細胞的遷移能力；采用MTT法分別檢測空白膠束、市售多帕菲和DTX-PM對4T1細胞的體外細胞毒性做了評價；通過流式細胞

4、儀分別檢測空白膠束、市售多帕菲和DTX-PM對4T1細胞的凋亡情況；利用激光共聚焦顯微鏡通過對香豆素-6的包載觀察DTX-PM進入4T1細胞的入胞情況。
　　結(jié)果：1H-NMR顯示其平均分子量在3300左右，臨界膠束濃度為4.677μg/mL，MALDI-TOF-TOF-MS顯示檢測峰主要為3300 Da，但含有少量2000Da以下的雜質(zhì)。采用薄膜水化法制備載藥膠束，通過單因素考察確定的最佳制備條件為：藥物與材料比為1:5，乙腈量

5、為1 mL，超聲時間為30 s，旋蒸時間為30 min，旋轉(zhuǎn)速度為80 rpm，水化體積為1 mL；在最佳制備條件下制備的DTX-PM測定其平均粒徑為(16.2±0.28) nm，PDI值為0.107±0.026，平均Zeta電位為-1.35mv；通過HPLC檢測，得出載藥膠束的包封率為(89.6±0.22)％，載藥量為(14.01±0.16)%；體外釋放顯示DTX-PM釋放平穩(wěn)，充分，而市售多帕菲出現(xiàn)突釋現(xiàn)象；溶血試驗表明市售多帕菲在

6、濃度為0.1、0.25、0.5、0.75和1 mg/mL時，對豚鼠紅血球的溶血率分別達到了0%、32.45%、34.24%、39.52%、41.74%，而DTX-PM制劑在上述濃度中均不存在溶血現(xiàn)象。
　　載多西他賽納米膠束的體外評價：細胞遷移試驗顯示，市售多帕菲和DTX-PM都抑制了細胞的增殖，并且市售多帕菲比DTX-PM抑制細胞增殖的能力更強；MTT法結(jié)果顯示，不同濃度藥物的細胞增殖抑制率顯示,低濃度載藥膠束的細胞增殖抑制率高

7、于市售多帕菲，具有較好的體外活性；細胞凋亡試驗顯示，說明了膠束化藥物更能顯著的誘導(dǎo)4T1細胞的晚期凋亡；入胞試驗表明，膠束在60 min內(nèi)充分入胞，速度較快。
　　結(jié)論：多西他賽嵌段共聚物膠束呈球形，粒徑分布均勻，性質(zhì)穩(wěn)定。載多西他賽納米膠束能夠更有效地抑制小鼠4T1細胞的增長，是一種有前景的新型納米給藥技術(shù)，為乳腺癌腫瘤的治療提供重要參考依據(jù)。
　　第二部分:
　　目的：為了制備TZT-9片劑，本部分系統(tǒng)的研究了TZ

8、T-9片劑的成型工藝及質(zhì)量標(biāo)準，研制出安全、有效、穩(wěn)定、可控的片劑。
　　方法：我們系統(tǒng)研究了TZT-9制劑的成型工藝和質(zhì)量標(biāo)準。為了提高工藝適應(yīng)性，采用粉末直接壓片的方法，并對影響TZT-9片的成型工藝的主藥含量、吸附劑、填充劑、崩解劑等方面因素進行篩選與優(yōu)化。為防止TZT-9片出現(xiàn)嚴重的吸濕問題，所以制劑進行了防潮薄膜包衣；為考察TZT-9片劑的工藝重現(xiàn)性，所以制備了三批中試規(guī)模的TZT-9片劑，并對其質(zhì)量進行檢測；同時為了長

9、期保存，對TZT-9薄膜包衣片進行了鋁塑包裝。
　　質(zhì)量標(biāo)準研究中按《中國藥典》2010版一部附錄ID項下片劑的有關(guān)規(guī)定對TZT-9片的性狀、鑒別、檢查、含量測定等方面進行系統(tǒng)地研究，同時建立TZT-9片中15-羥基內(nèi)酯醇（TL-1）、地芰普內(nèi)酯（TL-2）和雷公藤內(nèi)酯醇(TL-3)的含量測定方法；并分別測定了TL-1、TL-2和TL-3的日內(nèi)精密度、日間精密度、溶液穩(wěn)定性、回收率、最低定量限與最低檢出限的測定。
　　結(jié)果：

10、根據(jù)試驗結(jié)果最終確定TZT-9片的最優(yōu)處方為（每1000片用量）：TZT-9提取物0.25 g，微晶纖維素37.66 g，直壓輔料75.34 g，羧甲淀粉鈉4.8 g，二氧化硅0.75 g，硬脂酸鎂1.2 g。TZT-9提取物先與二氧化硅充分混合，再加入其他輔料攪拌混合均勻，調(diào)節(jié)壓片機壓力，壓制成重約120 mg的片劑，其硬度達到80 N，崩解時間1.44 min，且片面光滑無缺，成形性好。對三批中試放大的片劑進行包衣，每片3％的包衣增

11、重。
　　采用高效液相色譜法測定TZT-9片劑中三種主要成分TL-1、TL-2和TL-3的含量，結(jié)果表明TL-1在0.196-2.94μg范圍內(nèi)，與相應(yīng)峰面積呈良好線性關(guān)系(r2=0.9998)；回收率高濃度RSD=102.39%，中濃度RSD=100.34%，低濃度RSD=100.45%；日內(nèi)精密度RSD=1.42%(n=6)，溶液穩(wěn)定性RSD=1.80%(n=4)；日間精密度高濃度RSD=8.60%(n=5)，中濃度RSD=1

12、.75%，低濃度RSD=4.24%；最低檢出限為3.27 ng；最低定量限為1.31 ng。
　　TL-2在0.194-3.88μg范圍內(nèi)，與相應(yīng)峰面積呈良好線性關(guān)系(r2=0.9996)；回收率高濃度RSD=100.15%，中濃度RSD=98.66%，低濃度RSD=98.65%；日內(nèi)精密度RSD=0.38%(n=6)，溶液穩(wěn)定性RSD=6.94%(n=4)；日間精密度高濃度RSD=1.48%(n=5)，中濃度RSD=6.44%，

13、低濃度RSD=2.17%；最低檢出限為1.94ng；最低定量限為0.97 ng。
　　TL-3在0.36-3.28μg范圍內(nèi)，與相應(yīng)峰面積呈良好線性關(guān)系(r2=0.9997)；回收率高濃度RSD=101.86%，中濃度RSD=98.72%，低濃度RSD=100.28%；日內(nèi)精密度RSD=1.02%(n=6)，溶液穩(wěn)定性RSD=5.84%(n=4)；日間精密度高濃度RSD=0.68%(n=5)，中濃度RSD=0.30%，低濃度RSD

14、=1.05%；最低檢出限為6.07 ng；最低定量限為2 ng。
　　三批中試放大的含量測定結(jié)果為：20130801批TL-1含量為35.88μg，TL-2為69.7μg，TL-3為31.22μg；20130802批TL-1含量為37.39μg，TL-2為74.19μg，TL-3為30.08μg；20130803批TL-1含量為35.13μg，TL-2為74.04μg，TL-3為31.95μg。且三批含量均勻度均合格，片重差異20