皮下及網(wǎng)膜脂肪組織巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換在NAFLD發(fā)生過(guò)程中的作用.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外酒精和其它明確的損害肝臟的因素,以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合癥,包括非酒精性單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相關(guān)性肝纖維化、肝硬化,甚至肝癌,與胰島素抵抗和遺傳易感性等關(guān)系密切。最近的研究表明巨噬細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)換可能在NAFLD中起到了重要作用,參與了NAFLD的演進(jìn)。
　　巨噬細(xì)胞有兩種不同的表型狀態(tài),分別為經(jīng)典活化型即M1型,替代活化型M2型。M1型亞群巨噬細(xì)胞被

2、IFN-γ、GM-CSF、TNF所誘導(dǎo),M1型亞群巨噬細(xì)胞通常被認(rèn)為是正向作用的效應(yīng)細(xì)胞,是一種炎癥介質(zhì)。M2型亞群巨噬細(xì)胞主要通過(guò)IL-4、IL-10、IL-13、慢性病毒感染及皮質(zhì)醇激素等誘導(dǎo)刺激,主要參與寄生蟲(chóng)感染、免疫、炎癥下調(diào)、組織修復(fù)、凋亡小體及誘導(dǎo)血管再生中發(fā)揮重要作用。目前有研究認(rèn)為巨噬細(xì)胞的不同表型狀態(tài)與NAFLD有著密切關(guān)系,既往研究主要關(guān)注了巨噬細(xì)胞在肝臟組織中的作用,很少關(guān)注皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織中的巨噬細(xì)胞

3、在NAFLD中的作用。
　　臨床資料及方法
　　病例選擇:
　　1.選取2012年4~10月在我院診斷的NAFLD伴單純性膽囊結(jié)石及非NAFLD伴單純性膽囊結(jié)石,且年齡為18~60歲的患者納入分析。明確為NAFLD的患者27例(NAFLD組),男10例,女17例;排除NAFLD及其他一切肝病,且肝功正常的單純性膽囊結(jié)石患者28例(非NAFLD組),男5例,女23例。
　　2.收集患者臨床資料:登記患者姓名、住院號(hào)

4、、年齡、性別、BMI、腹圍。所有納入研究患者均簽署知情同意書(shū),醫(yī)院倫理中心備案。肝組織標(biāo)本、皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織在獲得患者知情同意后通過(guò)腹腔鏡手術(shù)獲得,皮下脂肪組織從上腹部的腹壁脂肪組織獲得,網(wǎng)膜脂肪從鄰近膽囊的大網(wǎng)膜獲得。
　　3.實(shí)驗(yàn)室檢測(cè):所有研究對(duì)象均于禁食飲水12h后,于入院次日清晨抽取肘靜脈血。采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定如下血液學(xué)指標(biāo):血糖、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TB)、胰島素

5、、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA),并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。
　　4.病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn):肝組織行HE染色,皮下脂肪組織、網(wǎng)膜脂肪組織分別行HE染色及免疫組化檢測(cè)?？笴D68免疫組織化學(xué)標(biāo)記巨噬細(xì)胞,抗CD11C和抗CD206分別標(biāo)記M1亞群巨噬細(xì)胞及M2亞群巨噬細(xì)胞。對(duì)肝組織切片的診斷采用NAFLD活動(dòng)度評(píng)分(NAS)。
　　5.ELISA檢測(cè)血清中IL-6、MCP-1的值并分析血清中IL-6與MCP-1

6、和皮下、網(wǎng)膜巨噬細(xì)胞、M1亞群巨噬細(xì)胞、M2亞群巨噬細(xì)胞的相關(guān)性。
　　6.利用SPSS19及Prism5軟件,對(duì)皮下脂肪組織、網(wǎng)膜脂肪組織的CD68、CD11C及CD206陽(yáng)性細(xì)胞與肝臟脂肪變、NAS評(píng)分進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果
　　1.NAFLD組與非NAFLD患者比較,在年齡、腹圍、血糖、ALT、AST、TB、FFA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而B(niǎo)MI、胰島素、TG、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR,即空腹

7、血糖×空腹胰島素/22.5)較非NAFLD組患者升高(P<0.05)。
　　2.NAFLD組與非NAFLD組比較,皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織CD68、CD11C及CD206陽(yáng)性染色數(shù)量均較非NAFLD組顯著增加(P<0.05)。
　　3.兩組患者皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織巨噬細(xì)胞、M1亞群巨噬細(xì)胞及M2亞群細(xì)胞巨噬細(xì)胞數(shù)量比較,NAFLD組皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織的巨噬細(xì)胞多于非NAFLD組,NAFLD組皮下脂肪組織巨噬細(xì)

8、胞數(shù)量的均值為(26.55±10.74)個(gè),網(wǎng)膜脂肪組織巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(41.50±10.47)個(gè);非NAFLD組皮下脂肪組織巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(15.57±5.67)個(gè),網(wǎng)膜脂肪組織巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(29.93±11.49)個(gè),兩組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。NAFLD組皮下脂肪組織M1亞群巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(9.93±4.51)個(gè),網(wǎng)膜脂肪組織M1亞群巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(14.52±3.62)個(gè);非NA

9、FLD組皮下脂肪組織M1亞群巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(4.18±1.98)個(gè),網(wǎng)膜脂肪組織M1亞群巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(8.17±4.39)個(gè),兩組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。NAFLD組皮下脂肪組織M2亞群巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(15.22±6.74)個(gè),非NAFLD組皮下脂肪組織M2亞群巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(9.60±3.55)個(gè),兩組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。NAFLD組網(wǎng)膜脂肪組織M2亞群巨噬細(xì)胞數(shù)量的均

10、值為(21.15±11.25)個(gè),非NAFLD組網(wǎng)膜脂肪組織M2亞群巨噬細(xì)胞數(shù)量的均值為(19.86±8.47)個(gè),兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。NAFLD組皮下脂肪組織M1/M2的均值為0.66±0.23,網(wǎng)膜脂肪組織M1/M2的均值為0.59±0.27;非NAFLD組皮下脂肪組織M1/M2的均值為0.45±0.16,網(wǎng)膜脂肪組織M1/M2的均值為0.42±0.20,兩組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　

11、　4.在NAFLD組中M1亞群巨噬細(xì)胞、M2亞群巨噬細(xì)胞的數(shù)量與NAS評(píng)分的相關(guān)性,對(duì)NAFLD患者的肝臟損害進(jìn)行NAS評(píng)分,27例NAFLD患者中,1例為7分,4例為6分,7例為5分,3例為4分,7例為3分,4例為2分,1例為1分。在NAFLD患者的皮下脂肪組織中CD68陽(yáng)性細(xì)胞、CD11C陽(yáng)性細(xì)胞及CD206陽(yáng)性細(xì)胞與NAS評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.496,r=0.589,r=0.657,P<0.01)。NAFLD患者的網(wǎng)膜脂肪組織中,

12、CD68陽(yáng)性細(xì)胞及CD11C陽(yáng)性細(xì)胞與NAS評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.426,P<0.05;r=0.465,P<0.01),CD206與NAS評(píng)分無(wú)明顯相關(guān)(r=0.32,P>0.05)。但皮下及網(wǎng)膜脂肪組織的CD11C/CD206陽(yáng)性細(xì)胞與NAS評(píng)分無(wú)明顯相關(guān)(r=0.242,r=0.168,P>0.05)。
　　5.NAFLD組與非NAFLD組比較,NAFLD組IL-6的水平高于非NAFLD組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),

13、非NAFLD組MCP-1高于NAFLD組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在NAFLD組血清IL-6與皮下及網(wǎng)膜脂肪組織中巨噬細(xì)胞、M1亞群巨噬細(xì)胞及M2亞群巨噬細(xì)胞無(wú)明顯相關(guān)(r=0.082,r=-0.158,r=-0.010,r=0.212,r=0.019,r=0.277,P>0.05);血清MCP-1與皮下及網(wǎng)膜脂肪組織中巨噬細(xì)胞、M1亞群巨噬細(xì)胞及M2亞群巨噬細(xì)胞無(wú)明顯相關(guān)(r=0.006,r=0.084,r=0.007,r=

14、-0.189,r=-0.059,r=-0.179,P>0.05)。血清中IL-6及MCP-1與NAS評(píng)分無(wú)明顯相關(guān)(r=-0.166,r=0.077,P>0.05)。
　　結(jié)論
　　1.NAFLD患者的BMI、胰島素、TG、胰島素抵抗指數(shù)較非NAFLD組顯著升高,提示NAFLD患者與胰島素抵抗密切相關(guān)。
　　2.在NAFLD患者的皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織的巨噬細(xì)胞數(shù)量、M1亞群巨噬細(xì)胞數(shù)量、M2亞群巨噬細(xì)胞的數(shù)量及M

15、1/M2都同時(shí)增加,以M1亞群巨噬細(xì)胞增加更為明顯,說(shuō)明皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織中的巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換可能參與了NAFLD的疾病進(jìn)展。
　　3.NAFLD患者無(wú)論皮下脂肪還是網(wǎng)膜脂肪的巨噬細(xì)胞都與肝臟脂肪變、炎癥、纖維化密切相關(guān),因皮下脂肪更易取得,臨床上可否將皮下脂肪的巨噬細(xì)胞及各亞型數(shù)量作為預(yù)測(cè)NAFLD嚴(yán)重程度的指標(biāo)需進(jìn)一步研究。
　　4.血清中巨噬細(xì)胞相關(guān)的炎癥因子IL-6及MCP-1不能很好的反映NAFLD患者肝臟