全麻藥物對培養(yǎng)大鼠皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞興奮性和遞質(zhì)釋放的影響.pdf

1、背景與目的：星形膠質(zhì)細(xì)胞已被證明在興奮后可釋放出多種神經(jīng)遞質(zhì)至突觸間隙，并作用于突觸前膜及突觸后膜，這些由星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放出的神經(jīng)遞質(zhì)被稱為膠質(zhì)遞質(zhì)。因此，星形膠質(zhì)細(xì)胞被認(rèn)為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（the central nervous system，CNS）突觸信息傳遞及調(diào)控過程的重要組成部分。本實(shí)驗(yàn)旨在探究全身麻醉藥物對皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用，觀察全身麻醉藥物對星形膠質(zhì)細(xì)胞鈣瞬變（Calcium transients）及膠質(zhì)遞質(zhì)釋放的影響，

2、分析其可能作用機(jī)制，為全麻機(jī)制研究提供新思路。
　　方法：培養(yǎng)并純化大鼠皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞，免疫熒光染色技術(shù)觀察膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein, GFAP)表達(dá)，鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞純度；反射熒光成像系統(tǒng)（reflected fluorescence system）動態(tài)觀察全身麻醉藥物丙泊酚（propofol）、氯胺酮（Ketamine，Ket）以及右旋美托咪啶（dexmedtomidi

3、ne, Dex）對二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）誘發(fā)星形膠質(zhì)細(xì)胞胞內(nèi)鈣瞬變的影響；應(yīng)用ELISA法檢測胞內(nèi)三磷酸肌醇（inositol triphosphate，IP3）的水平變化；應(yīng)用液相色譜技術(shù)，觀察全麻藥物作用下皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放谷氨酸（glutatmate，Glu），γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid， GABA），絲氨酸（ Serine， Ser）的情況；最后使用M型乙酰膽

4、堿受體受體（ muscarinic type acetylcholine receptor）阻斷劑與N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-asparate，NMDA）受體阻斷劑，明確全麻藥物對星形膠質(zhì)細(xì)胞作用的靶點(diǎn)受體。
　　結(jié)果：
　　1.免疫熒光染色鑒定所培養(yǎng)皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞純度大于90％；
　　2.100 nM~100μM ADP均可誘發(fā)培養(yǎng)的皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞[Ca2+]i升高，即鈣瞬變，且呈濃度依賴趨勢

5、。其中100 nM ADP可誘發(fā)[Ca2+]i的輕度上升，但不具有統(tǒng)計學(xué)意義，而1μM、10μM、100μM的ADP則能誘發(fā)出顯著的[Ca2+]i上升，且差異顯著（P＞0.01），經(jīng)測算ADP激活培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的半數(shù)有效濃度為208.04±14.94 nM；
　　3. Ket可呈濃度依賴性抑制10μM ADP誘發(fā)的星形膠質(zhì)細(xì)胞鈣瞬變，且半抑制濃度值為236.23±3.62μM；而Propofol（100μM）和Dex（50μM、

6、100μM）未能對10μM ADP誘導(dǎo)產(chǎn)生的星形膠質(zhì)細(xì)胞鈣瞬變產(chǎn)生明顯影響（P＞0.05）；
　　4.1μM ADP可顯著提升星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)IP3水平（P＜0.01）；然而Ket、M型乙酰膽堿受體阻斷劑阿托品（Atropine）和NMDA受體阻斷劑（AP5）均對10μM ADP作用下星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)IP3水平?jīng)]有影響（P＞0.05）；
　　5. Ket并不影響ADP作用下星形膠質(zhì)細(xì)胞Glu，Ser的釋放水平（P＞0.05）。<