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文檔簡介
1、目的:探討自體角朊細(xì)胞在自體皮島抑制效應(yīng)中的作用及其機(jī)制。 方法: 1.分離外周血淋巴細(xì)胞和表皮細(xì)胞,建立MELR試驗(yàn)體系,通過引入附加的自體表皮細(xì)胞(并以等量的異體表皮細(xì)胞為對照),在體外模擬自體皮島效應(yīng)。 2.分析加入和不加入自體角朊細(xì)胞的MELR體系中,IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10等幾種細(xì)胞因子分泌的動力學(xué)曲線。根據(jù)以上動力學(xué)曲線,在加入和不加入自體角朊細(xì)胞的MELR體系中,引入相應(yīng)的中和性抗
2、體,觀察反應(yīng)格局的變化。 3.通過IL-10基因敲除小鼠實(shí)驗(yàn),來觀察IL-10在誘導(dǎo)免疫抑制中T細(xì)胞和角朊細(xì)胞各自的重要作用。 4.對角朊細(xì)胞進(jìn)行B7-1的轉(zhuǎn)染,以及負(fù)性調(diào)節(jié)分子CTLA-4的阻斷實(shí)驗(yàn),分析這些經(jīng)典的共刺激分子與角朊細(xì)胞誘導(dǎo)抑制的關(guān)系。 5.觀察MELR體系中角朊細(xì)胞B7-H1的表達(dá)情況,并通過B7-H1單抗的阻斷實(shí)驗(yàn),來探討這一新發(fā)現(xiàn)的B7分子在自體皮島抑制效應(yīng)中的作用。 結(jié)果:
3、 1.在La+Eb+Kcb的實(shí)驗(yàn)組中,8小時(shí)開始出現(xiàn)IL-2,并逐漸增高,16小時(shí)開始有IFN-γ的出現(xiàn),也逐漸增高。但始終沒有檢測到IL-4和IL-10的存在。在La+Eb+Kca的實(shí)驗(yàn)組中,起初的一段時(shí)間里,也出現(xiàn)了較低濃度的IL-2和IFN-γ,到了32小時(shí)后開始下降并消失。以此同時(shí)開始出現(xiàn)IL-10和IL-4,并開始持續(xù)增高,特別是IL-10在48小時(shí)升高尤為明顯。單獨(dú)加入抗IL-10時(shí),在32小時(shí)以前,可明顯緩解抑制,這可能與
4、系統(tǒng)早期只出現(xiàn)IL-10有關(guān)。而在32小時(shí)以后或單獨(dú)加入抗IL-4時(shí),都沒有很大的緩解作用。 2.在同種異體增殖抑制作用中起主要作用的是淋巴細(xì)胞來源的IL-10而并非角朊細(xì)胞分泌的IL-10,但后者有部分協(xié)同作用。 3.自體角朊細(xì)胞在轉(zhuǎn)染B7-1基因后,對同種異體增殖反應(yīng)的抑制誘導(dǎo)能力消失,但加入抗B7-1單抗阻斷B7-1的作用后,其誘導(dǎo)抑制的能力又恢復(fù)。而CTLA-4在自體角朊細(xì)胞誘導(dǎo)的抑制中并不發(fā)揮相關(guān)作用。
5、 4.B7-H1在MELR的體系中4小時(shí)開始有微弱的表達(dá),而8小時(shí)之后,就有較強(qiáng)的表達(dá);加入B7-H1單抗或PD-1單抗來阻斷實(shí)驗(yàn)后,自體角朊細(xì)胞的抑制作用緩解或消失。 結(jié)論: 1.自體角朊細(xì)胞是通過激活T細(xì)胞分泌IL-10激活Th2亞群而抑制Th1亞群來誘發(fā)局部免疫抑制。 2.自體角朊細(xì)胞通過B7-1、B7-2以外的其他分子提供共刺激信號,而且其負(fù)向調(diào)節(jié)作用與CTLA-4無關(guān)。 3.自體角朊細(xì)胞是通過B
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