萊菔硫烷對(duì)TNF-α誘導(dǎo)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)表達(dá)及活性氧產(chǎn)生的影響.pdf

1、目的：
　　觀察萊菔硫烷(Sulforaphane，SFN)對(duì)TNF-α誘導(dǎo)小鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)表達(dá)及活性氧產(chǎn)生的影響，并探討其可能的機(jī)制，從而為腦損傷相關(guān)疾病的治療提供依據(jù)。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞系 bEnd.3，乳酸脫氫酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)篩選 SFN的最大作用濃度。隨后根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃?組：（1）空白對(duì)照組（僅給予0.1％DMSO）；（2）TNF-α組（5ng/ml）；（3）SFN+TNF

2、-α組（在TNF-α組基礎(chǔ)上給予5，10，30μg/ml SFN共同孵育24h）。ELISA檢測(cè)IL-1β和內(nèi)皮素（endothelin， ET）的產(chǎn)生；熒光探針檢測(cè)ROS的產(chǎn)生；實(shí)時(shí)PCR和Western blot分別檢測(cè)血紅素氧合酶（Heme oxygenase，HO）-1 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1）乳酸脫氫酶釋放實(shí)驗(yàn)顯示，0～30μg/ml SFN對(duì)bEnd.3細(xì)胞LDH漏出率無明顯影響（P>0.05

3、）。因此隨后研究當(dāng)中選取30μg/ml SFN作為使用濃度；
　　2） TNF-α刺激前，bEnd.3細(xì)胞無IL-1β和ET產(chǎn)生。5ng/ml TNF-α處理后，IL-1β和ET含量分別為（1.15±0.09）ng/ml和（31.5±3.2）pg/ml，與對(duì)照組相比， P<0.05。而5～30μM SFN能以劑量依賴性方式降低TNF-α誘導(dǎo)的IL-1β及ET產(chǎn)生；當(dāng)SFN濃度為30μg/ml時(shí)，IL-1β和ET濃度分別降至（0.4

4、5±0.05） ng/ml和（11.2±2.8）pg/ml。
　　3） bEnd.3細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)下無ROS產(chǎn)生。5ng/ml TNF-α處理后，ROS含量增高了84%（P<0.05）。而SFN處理能顯著降低TNF-α誘導(dǎo)bEnd.3細(xì)胞產(chǎn)生ROS，其中30μg/ml SFN處理能將ROS水平降低至46.5%（P<0.05）；
　　4）實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，bEnd.3細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)下HO-1表達(dá)水平較低。TNF-α處理后HO

5、-1表達(dá)明顯增加；而經(jīng)SFN處理后，與HO-1 mRNA水平進(jìn)一步增高；
　　5） TNF-α處理能誘導(dǎo)HO-1表達(dá)，而SFN能進(jìn)一步提高其蛋白表達(dá)；
　　6）與SFN組相比，bEnd.3細(xì)胞用HO-1抑制劑ZnPP預(yù)處理后，IL-1β和ET含量明顯增高，兩者分別為（0.45±0.05）pg/ml VS（1.16±0.05）pg/ml和（14.5±3.1）pg/ml VS（35.6±3.1）pg/ml（P<0.05）。而HO