YWHAZ和VDAC1基因在甲狀旁腺腺瘤中的表達(dá)及臨床相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景
　　 原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥，臨床表現(xiàn)為高鈣血癥、低磷血癥、骨骼病變以及泌尿系統(tǒng)結(jié)石等癥狀。該病的致病因素存在較大異質(zhì)性，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)展，不斷涌現(xiàn)出許多針對(duì)其腫瘤標(biāo)記物的研究。2011年Giusti等人通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選出YWHAZ和VDAC1基因在甲狀旁腺腺瘤中過(guò)量表達(dá)。故本實(shí)驗(yàn)在上述研究的基礎(chǔ)上，希望進(jìn)一步探求YWHAZ和VDACl基因在我國(guó)甲狀旁腺腺瘤中的表達(dá)情況，并分析其與患者臨床表現(xiàn)之間的

2、關(guān)系，為甲狀旁腺腫瘤的早發(fā)現(xiàn)、早診斷以及開辟新的治療靶點(diǎn)提供一定的幫助。
　　 RNAlater可以穩(wěn)定保護(hù)RNA的完整性，確保下游分析得到的數(shù)據(jù)真實(shí)地反應(yīng)樣品信息。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較液氮速凍法和RNAlater保存法的兩組標(biāo)本RNA的表達(dá)情況，來(lái)探討RNAlater在長(zhǎng)期保存甲狀旁腺組織中發(fā)揮的作用，為組織標(biāo)本庫(kù)的規(guī)范化建設(shè)提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 研究目的
　　 1.評(píng)價(jià)不同保存方式對(duì)于甲狀旁腺腺瘤標(biāo)本的影響。

3、
　　 2.檢測(cè)YWHAZ和VDAC1基因在中國(guó)甲狀旁腺腺瘤組織中的表達(dá)情況，分析其表達(dá)與患者臨床表型之間的關(guān)系。
　　 研究方法
　　 1.收集22例甲狀旁腺腺瘤組織標(biāo)本，其中11例經(jīng)RNAlater處理后-80℃保存，其余11例為術(shù)后即刻液氮封存，并轉(zhuǎn)移至-80℃保存。比較兩組標(biāo)本RNA保存情況的差異。
　　 2.收集28例散發(fā)性甲狀旁腺腺瘤的組織標(biāo)本及臨床資料，提取細(xì)胞總RNA和總蛋白，使用Real

4、Time-PCR和WesterBlot等方法，檢測(cè)甲狀旁腺腺瘤細(xì)胞中YWHAZ和VDAC1基因的RNA及蛋白表達(dá)水平，并進(jìn)一步分析其與患者臨床表型的關(guān)系。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1.速凍法與RNAlater法相比，在組織總RNA的提取純度和濃度以及RNA完整性的結(jié)果上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但RNAlater組內(nèi)參基因β-actin的表達(dá)量高于速凍法組(P＜0.01)。
　　 2.28例甲狀旁腺腺瘤的最大直徑與患者術(shù)前總血

5、鈣、血磷、血ALP、血PTH和骨痛癥狀等因素顯著相關(guān)(P＜0.05)。
　　 3.YWHAZ基因高表達(dá)組患者與低表達(dá)組相比，術(shù)前游離鈣、總血鈣水平高，血磷水平低，同時(shí)骨質(zhì)破壞表現(xiàn)也更為嚴(yán)重(P＜0.05)。
　　 4.VDAC1基因在28例甲狀旁腺腺瘤中表達(dá)水平較低，且與患者生化指標(biāo)無(wú)明顯的相關(guān)性。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
　　 1.RNAlater與速凍方法相比，對(duì)于保存甲狀旁腺腺瘤組織RNA具有一定優(yōu)勢(shì)。