卵巢早衰相關位點在塞爾維亞患者中的驗證研究.pdf

1、研究背景及目的:
　　 卵巢早衰(premature ovarian failure，POF)是指女性40歲之前發(fā)生的卵巢功能衰竭。卵巢早衰的發(fā)病率，在小于40歲的女性中大約為1％，小于30歲的女性中大約為0.1％。卵巢早衰的病因和發(fā)病機制較為復雜且尚未完全清楚，大部分患者病因不清，屬“特發(fā)性卵巢早衰”。
　　 近年來，通過對POF遺傳機制的研究，發(fā)現(xiàn)了一系列與卵巢發(fā)育和卵子生成相關的候選基因，但僅能解釋一小部分患者的發(fā)

2、病原因。前期通過對391例中國漢族POF患者進行全基因組關聯(lián)研究(genome-wide association studies，GWAS)，同時在400例POF患者中進行驗證研究，發(fā)現(xiàn)候選區(qū)域8q22.3關聯(lián)位點(rs10464815、rs10808365、rs3847152、rs3847153、rs3847154、rs3843552、rs10955242、rs3843555)，盡管該區(qū)域內未發(fā)現(xiàn)相關候選基因，但推測其鄰近區(qū)域存在與卵

3、巢發(fā)育和卵子生成有關的調控區(qū)域。前期在中國POF患者中進行早絕經(jīng)(early menopause，EM)相關位點關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)3個相關SNPs位點，分別為位于HK3基因rs2278493、ESR1基因rs2234693和BRSK1基因rs12611091位點。目前尚無其他人群上述相關SNPs位點的驗證研究。
　　 本實驗依據(jù)最小等位基因頻率（minor allele frequency,MAF）＞3％的原則，擬選擇已報道的與中國漢

4、族POF相關聯(lián)的SNPs位點，包括rs2278493、rs2234693、rs12611091、rs3847153和rs3108910等，在塞爾維亞人群中驗證其與POF的相關性，并分別比較不同等位基因頻率在塞爾維亞人種與中國漢族人群的分布差異。
　　 研究對象與方法:
　　 依據(jù)POF的診斷標準，選擇英國塞爾維亞人種的特發(fā)性POF患者197例，并選擇同期就診的正常女性552例作為對照，所有研究對象均為英國塞爾維亞人種且無

5、親緣關系。分別抽取其外周血，提取全血的基因組DNA;利用PCR技術和基因測序技術對SNPs位點rs2278493、rs2234693、rs12611091、rs3847153和rs3108910的等位基因頻率進行分析。使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對各組數(shù)據(jù)進行x2檢驗，設定檢驗水準α=0.05，若P≤0.05則拒絕原假設，表示兩組之間的差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 (1)塞爾維亞人種中各SNPs位點不同等位基因

6、頻率在POF組和正常對照組之間的比較:HK3基因rs2278493位點（A/G多態(tài)）A等位基因頻率(31.2％vs30.5％，P=0.798＞0.05);ESR1基因rs2234693位點（C/T多態(tài)）C等位基因頻率(46.1％vs49.3％，P=0.296＞0.05);BRSK1基因rs12611091位點（C/T多態(tài)）C等位基因頻率(54.3％vs52.9％，P=0.629＞0.05);rs3847153位點(C/T多態(tài))C等位基因

7、頻率(4.3％vs4.6％，P=0.803＞0.05);rs3108910位點（G/A多態(tài)）G等位基因頻率(26.1％vs23.7％，P=0.339＞0.05)。
　　 (2)各SNPs位點不同等位基因頻率在塞爾維亞人種POF患者和中國漢旗人種POF患者之間的比較:HK3基因rs2278493位點(A/G多態(tài))A等位基因頻率(31.2％vs34.51％，P=0.246＞0.05);ESR1基因rs2234693位點（C/T多態(tài)）

8、C等位基因頻率(46.1％vs36.55％，P=0.002＜0.05);BRSK1基因rs12611091位點（C/T多態(tài)）C等位基因頻率(54.3％vs75.78％，P＜0.0001);rs3847153位點(C/T多態(tài))C等位基因頻率(4.3％vs30.08％，P＜0.0001);rs3108910位點(G/A多態(tài))G等位基因頻率(26.1％vs52.05％，P＜0.0001)。
　　 結論:
　　 rs227849