天然及氧化修飾高密度脂蛋白對(duì)HepG2細(xì)胞MSRG轉(zhuǎn)錄影響的初步研究.pdf

1、為研究代謝綜合征(metabolic syndrome，MS)與動(dòng)脈粥樣硬化等疾病之間的關(guān)系，本研究室曾通過高糖膳食構(gòu)建了高甘油三酯血癥大鼠模型，其具有代謝綜合征的基本特征。用該大鼠模型肝臟基因的差異表達(dá)序列片段篩選人肝臟cDNA文庫后發(fā)現(xiàn)一條新的基因，國內(nèi)外尚未有關(guān)于該基因的報(bào)道。該新基因被暫時(shí)命名為代謝綜合征相關(guān)新基因(metabolism syndrome-related novel gene，MSRG)。 為進(jìn)一步了解M

2、SRG與MS的關(guān)系，研究MSRG的功能，我室正在對(duì)影響MSRG轉(zhuǎn)錄因素進(jìn)行系列研究。本文以HepG2細(xì)胞為研究對(duì)象，通過設(shè)計(jì)MSRG、β-actin引物及相應(yīng)的Taqman探針，建立了RealtimePCR定量檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄水平的方法。對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)MSRG轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)后，發(fā)現(xiàn)MSRG相對(duì)于β-actin為低轉(zhuǎn)錄基因。 我們用天然高密度脂蛋白(native high density lipoprotein，N-HDL)及氧

3、化修飾高密度脂蛋白(oxidized high density lipoprotein，OX-HDL)孵育HepG2細(xì)胞，觀察對(duì)細(xì)胞MSRG轉(zhuǎn)錄的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①在N-HDL 0～100mg/L組及OX-HDL 0～50mg/L組，MSRG轉(zhuǎn)錄隨N-HDL及OX-HDL濃度的增加有下降趨勢(shì)。與0mg/L組相比，MSRG在N-HDL 50mg/L、100mg/L組和OX-HDL 50mg/L組轉(zhuǎn)錄水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。

4、當(dāng)濃度高于此范圍，MSRG轉(zhuǎn)錄較最低水平有所升高。與N-HDL 100mg/L組相比，N-HDL 200mg/L組基因轉(zhuǎn)錄有所回升，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；與OX-HDL 50mg/L組相比，OX-HDL 100mg/L、200mg/L組MSRGmRNA含量有增高趨勢(shì)，且200mg/L組與50mg/L組間基因轉(zhuǎn)錄水平差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。②在N.HDL 0～24h組及OX-HDL 0～12h組，MSRG轉(zhuǎn)錄隨時(shí)間延長

5、有下降趨勢(shì)。與0h相比，N-HDL 12h、24h、36h組基因轉(zhuǎn)錄降低(p<0.05)，24h組MSRG mRNA含量最低：OX-HDL 6h、12h組基因轉(zhuǎn)錄較其0h組降低(P<0.05)，12h組MSRG轉(zhuǎn)錄水平最低。當(dāng)時(shí)間超過相應(yīng)范圍后，MSRG轉(zhuǎn)錄有回升傾向。與N-HDL 24h組相比，MSRG在N.HDL36h組轉(zhuǎn)錄有所回升，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；OX-HDL 24h、36h組MSRG轉(zhuǎn)錄較其12h組有所回升(p<

6、05)。③分別用100mg/L N-HDL或OX-HDL孵育HepG2細(xì)胞12h后，MSRG轉(zhuǎn)錄水平均較對(duì)照組顯著下降(p<0.05)，但二者間無顯著差異。N-HDL、OX-HDL組培養(yǎng)基總膽固醇濃度較孵育前下降，甘油三酯濃度較孵育前上升，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。細(xì)胞內(nèi)糖原、總膽固醇及甘油三酯濃度在三組間均無顯著性差異。我們發(fā)現(xiàn)：在低濃度及短時(shí)間內(nèi)，N-HDL及OX-HDL均可降低HepG2細(xì)胞MSRG的轉(zhuǎn)錄水平。N-HDL較