中國(guó)人Leber遺傳性視神經(jīng)病變的分子遺傳學(xué)和臨床研究.pdf

1、第一章 中國(guó)人Leber遺傳性視神經(jīng)病變一特殊家系的分子遺傳學(xué)研究 目的： 對(duì)中國(guó)漢族一缺乏三個(gè)主要原發(fā)突變位點(diǎn)的Leber遺傳性視神經(jīng)病變(Leberhereditaryopticneuropathy，LHON)家系成員，進(jìn)行全線粒體基因掃描，尋找可能的與疾病相關(guān)的線粒體基因突變位點(diǎn)。 方法： 中國(guó)人LHON一家系三代共14位母系成員接受全面的眼科臨床檢查，包括：視力、眼底檢查與照相、視野、視網(wǎng)

2、膜神經(jīng)纖維層厚度分析及視覺(jué)誘發(fā)電位檢查；常規(guī)苯酚氯仿法提取外周血DNA，針對(duì)線粒體基因全序設(shè)計(jì)的24對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，純化產(chǎn)物由ABI3700進(jìn)行測(cè)序，與健康對(duì)照者線粒體基因全序及最新劍橋標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)，分析可能的與疾病相關(guān)的線粒體基因突變位點(diǎn)。 結(jié)果：該家系表現(xiàn)為一典型的母系遺傳病，患者無(wú)痛性視力下降和視神經(jīng)萎縮的臨床表現(xiàn)符合LHON診斷。全線粒體基因測(cè)序未發(fā)現(xiàn)三個(gè)主要原發(fā)突變位點(diǎn)，但發(fā)現(xiàn)存在以下線粒體基因突變：T421

3、6C/ND1基因、A13651G/ND5基因和A15951G/tRNAThr基因。進(jìn)一步分析表明，該家系屬于亞洲人群的HaplogroupD4b1亞型。其中，T4216C突變是已報(bào)道LHON的繼發(fā)突變之一，多協(xié)同LHON主要的原發(fā)突變G11778A而致病，同時(shí)又是決定歐洲人群HaplogroupJ亞型的主要多態(tài)性位點(diǎn)；線粒體NDs基因的A13651G突變，是決定亞洲人群HaplogroupD4a的主要多態(tài)位點(diǎn)，突變導(dǎo)致中度保守的色氨酸突

4、變?yōu)楸彼?，跨膜蛋白疏水性的改變，由此可能影響呼吸鏈?fù)合體I的電子傳遞，從而影響線粒體的氧化磷酸化；tRNAThr基因突變A15951G已報(bào)道具有協(xié)同原發(fā)突變G11778A對(duì)LHON的致病作用。 結(jié)論： 本文首次報(bào)道了繼發(fā)突變T4216C獨(dú)立于原發(fā)突變?cè)趤喼奕巳篐aplogroupD4b1亞型的中國(guó)LHON家系中，也是T4216C與A13651G突變共同存在于亞洲人群HaplogroupD4b1亞型的首次報(bào)道。其與A15

5、951G的協(xié)同作用可能在該中國(guó)人LHON家系的發(fā)病機(jī)制中具有一定的作用。但該LHON家系缺乏主要的原發(fā)突變位點(diǎn)，進(jìn)一步提示除了線粒體基因突變外，核基因也可能與LHON的發(fā)病相關(guān)。 第二章G11778A突變型Leber遺傳性視神經(jīng)病變患者血清總SOD活力和MDA含量的研究 目的： 通過(guò)檢測(cè)G11778A突變型Leber遺傳性視神經(jīng)病變(LHON)患者血清總超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，了解LH

6、ON患者體內(nèi)氧化-抗氧化狀態(tài)。 方法： 本研究為病例-對(duì)照研究，納入了經(jīng)眼科檢查和線粒體基因測(cè)序確診的G11778A突變型LHON患者19例、攜帶者12例，以及正常對(duì)照者30例，分別應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法檢測(cè)受試者血清總SOD活力和MDA含量。 結(jié)果： LHON患者血清總SOD活力較攜帶者和正常對(duì)照者均明顯下降(q分別為7.085、8.351，均P<0.05)，攜帶者與正常對(duì)照者的血清總SOD

7、活力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=0.269，P>0.05)。LHON患者和攜帶者的血清MDA含量均明顯高于正常對(duì)照者(q分別為9.069、4.748，均P<0.05)，LHON患者的血清MDA含量也高于攜帶者(q=3.618，P<0.05)。 結(jié)論： LHON患者體內(nèi)抗氧化能力明顯下降，機(jī)體氧化-抗氧化系統(tǒng)失衡與LHON的發(fā)病有關(guān)。 第三章StratusOCT在Leber遺傳性視神經(jīng)病變視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層厚度分析中的應(yīng)用

8、 目的： 應(yīng)用StratusOCT測(cè)量Leber遺傳性視神經(jīng)病變(LHON)患者和攜帶者的視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層(Retinalnervefiberlayer,RNFL)厚度，以了解LHON患者和攜帶者的RNFL厚度特點(diǎn)和變化規(guī)律。 方法： 本研究納入了經(jīng)臨床和線粒體全基因掃描確診的G11778A突變型LHON母系家庭成員21例(41眼)，正常對(duì)照者136例(209眼)。根據(jù)病史和視功能檢查，將LHON家系成員

9、初步劃分為攜帶者和LHON患者；根據(jù)其眼底表現(xiàn)，進(jìn)一步劃分為正常攜帶者、臨床前期者、早期、進(jìn)展期和晚期患者。所有受試者均接受了StratusOCT檢查，采用的檢查程序是以視盤(pán)為中心直徑3.4mm的快速RNFL厚度測(cè)量程序。 結(jié)果： 眼底表現(xiàn)正常的LHON攜帶者的RNFL厚度與正常對(duì)照者相比無(wú)明顯差異；臨床前期者和LHON早期患者的顳側(cè)、上方、下方RNFL厚度，以及360°平均RNFL厚度均較正常對(duì)照者增厚；進(jìn)展期患者RN

10、FL表現(xiàn)為僅顳側(cè)變?。煌砥诨颊逺NFL則表現(xiàn)為所有象限均明顯變薄。 結(jié)論： 應(yīng)用StratusOCT測(cè)量RNFL厚度，有助于了解LHON攜帶者和患者的RNFL厚度特點(diǎn)和變化規(guī)律，能夠客觀反映LHON疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中RNFL的改變。將LHON病程分為早期、進(jìn)展期和晚期的臨床分期法，能夠更準(zhǔn)確地反映LHON的自然病程，并與其眼底改變相符合。對(duì)處于臨床前期者的隨訪有可能發(fā)現(xiàn)LHON發(fā)病的扳機(jī)點(diǎn)，以利于將來(lái)可能開(kāi)展的早期干預(yù)和