蜈蚣三七提取物抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎免疫機理的研究.pdf

1、目的：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是最常見的風(fēng)濕病之一，該病呈全球性分布，患病率、致殘率高。RA的病因病機極其復(fù)雜，細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)異常被認(rèn)為是RA發(fā)病的關(guān)鍵因素。RA關(guān)節(jié)滑膜內(nèi)浸潤的炎癥細(xì)胞中以T細(xì)胞最多，由T細(xì)胞過度激活引起的免疫損傷，加重了滑膜的炎癥反應(yīng)和滑膜組織增生。在RA的免疫炎癥反應(yīng)的發(fā)生和延續(xù)上，位于T細(xì)胞表面的共刺激分子、細(xì)胞凋亡分子及對T細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響的細(xì)胞因子起了至關(guān)重要的作用。 蜈蚣三七系毛茛科銀蓮花屬植物林蔭銀蓮

2、花(AnemoneflaccidaFR.Schmidt)的根莖，具有祛風(fēng)濕、助筋骨、消腫止痛等功效。我院中藥研究所由蜈蚣三七中分離得到蜈蚣三七提取物(總皂苷)，經(jīng)大量臨床前研究，證實其對RA有顯著療效，并已獲得國家5類新藥的臨床批件。本實驗即在此基礎(chǔ)上，運用現(xiàn)代藥理學(xué)技術(shù)，通過研究T細(xì)胞的共刺激分子、細(xì)胞凋亡分子和抗炎細(xì)胞因子在蜈蚣三七提取物治療RA過程中所起的作用，初步探討蜈蚣三七提取物治療RA的免疫調(diào)節(jié)機理，為蜈蚣三七提取物早日大規(guī)

3、模應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。 方法：采用Ⅱ型膠原性關(guān)節(jié)炎(CIA)小鼠為RA動物模型，將小鼠分為正常組、模型組、雷公藤片組、蜈蚣三七提取物高、中、低劑量組，灌胃給藥36d，運用流式細(xì)胞術(shù)、ELISA等手段，從病理、免疫、分子生物學(xué)等多個角度及從動物個體、組織、分子等多個層次研究蜈蚣三七提取物治療RA的作用特點和作用環(huán)節(jié)，闡明其作用機理。 結(jié)果：1CIA小鼠典型的關(guān)節(jié)炎體征在致炎后14～16d之間出現(xiàn)，病變?nèi)遮厙?yán)重，36d腫

4、脹達(dá)最高峰，小鼠的前后足均明顯腫脹，尾部出現(xiàn)結(jié)節(jié)。病變過程中，動物進(jìn)食量減少，逐漸消瘦，皮毛失去光澤。 2CIA小鼠的關(guān)節(jié)評分，蜈蚣三七提取物各劑量組及雷公藤片組與模型組比較有明顯降低，以低劑量組為佳(P＜0.001)。 3光鏡下觀察滑膜組織病理學(xué)形態(tài)，模型組，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞和滑膜增生明顯，并有大量炎性細(xì)胞浸潤；雷公藤片組，皮下軟組織內(nèi)可見少量炎性細(xì)胞浸潤，軟骨細(xì)胞和滑膜組織增生變厚，未見明顯炎性反應(yīng)；蜈蚣三七提取物各劑量

5、組均能不同程度的抑制炎性細(xì)胞的浸潤，以低劑量組最為顯著，高、中劑量組對軟骨細(xì)胞和滑膜增生的抑制作用不明顯，低劑量組則抑制作用顯著。 4流式細(xì)胞術(shù)檢測CIA小鼠外周血B7(B7-1&B7-2)、CD28、CTLA-4、Fas的表達(dá)水平，蜈蚣三七提取物對B7-1、B7-2、CD28的表達(dá)均無明顯影響，使CTLA-4的表達(dá)水平升高，高、低劑量組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)；使Fas的表達(dá)水平升高，高、中劑量組與模型組比較有

6、顯著性差異(P＜0.01)。 5ELISA法檢測CIA小鼠血漿IL-4、IL-10、IFN-γ的表達(dá)水平，蜈蚣三七提取物能夠提高IL-4、IL-10、IFN-γ的表達(dá)水平，高劑量組可使IL-10的含量升高，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)；中劑量組可使IL-4的含量升高，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)；低劑量組可使IFN-γ含量升高，與模型組比較具有顯著性差異(P＜0.001)。 結(jié)論：1蜈蚣三七提取物

7、治療Ⅱ型膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎具有顯著療效，能夠明顯減輕小鼠的關(guān)節(jié)腫脹，改善小鼠的全身狀況，包括飲食、毛色等，能顯著改善其滑膜組織病理形態(tài)，減輕其軟骨及滑膜增生，抑制炎性細(xì)胞的浸潤，低劑量效果尤佳。2蜈蚣三七提取物治療RA的可能機理：(1)上調(diào)CTLA-4的表達(dá)水平，增強B7/CTLA-4共刺激途徑，競爭性阻斷了CD28與B7分子的結(jié)合，下調(diào)或終止T細(xì)胞反應(yīng)，抑制T細(xì)胞活化及增殖，從而控制RA病程的發(fā)展；(2)上調(diào)Fas的表達(dá)水平，誘導(dǎo)炎癥細(xì)