依普拉芬防治去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究及其NO調(diào)控機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察不同劑量的人工合成的植物雌激素—依普拉芬對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的防治作用；體外培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞，觀察依普拉芬對成骨細(xì)胞增殖和成骨分化的影響；檢測依普拉芬對體外培養(yǎng)的大鼠成骨細(xì)胞和去卵巢大鼠一氧化氮(NO)以及一氧化氮合酶(NOS)生成的影響；探討依普拉芬防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用以及NO調(diào)控機(jī)制，為其更好的在臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法：(1)60只SD雌性大鼠，隨機(jī)分成六組：設(shè)一假手術(shù)組；腹腔手術(shù)切除大鼠雙側(cè)卵巢,

2、分為陰性對照組、依普拉芬低、中、高劑量組和雌激素對照組，分別給予基礎(chǔ)飼料和不同劑量受試物，12周后進(jìn)行骨密度、骨組織形態(tài)計量、生物力學(xué)以及骨代謝指標(biāo)測定，與雌激素對照，觀察給與依普拉芬對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的防治作用。(2)體外分離、培養(yǎng)、純化新生大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞，堿性磷酸酶染色及礦化結(jié)節(jié)染色鑒定，將不同濃度的依普拉芬加入培養(yǎng)液，測定細(xì)胞增殖情況、堿性磷酸酶(ALP)活性及鈣化結(jié)節(jié)。與雌激素對照，了解依普拉芬對成骨細(xì)胞增殖和分化的影響。(3

3、)體外分離培養(yǎng)新生SD大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞，取第二代細(xì)胞，培養(yǎng)液中分別加入不同濃度的依普拉芬，72小時后，測定各組細(xì)胞培養(yǎng)基中的NO濃度，RT-PCR方法檢測各組細(xì)胞中內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表達(dá)。(4)按第一部分方法建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型及分組，給與受試物12周后測定大鼠血清一氧化氮(NO)以及一氧化氮合酶(NOS)含量。用免疫組織化學(xué)方法檢測骨組織中eNOS以及iNOS的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)大鼠去卵巢后骨

4、密度顯著下降,股骨的力學(xué)性能以及骨代謝指標(biāo)有較大變化，彎曲強(qiáng)度和彎曲彈性模量明顯降低。給予依普拉芬后,可使骨密度顯著提高(P<0.01),存在一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系,同時彎曲強(qiáng)度和彎曲彈性模量明顯增加，但均低于雌激素對照組。(2)與陰性對照組相比，各濃度組的依普拉芬均可增加成骨細(xì)胞數(shù)量(P<0.01),提高成骨細(xì)胞的ALP活性和促進(jìn)鈣化結(jié)節(jié)形成(P<0.01)。其中10-8～10-5mol/L作用更為顯著。(3)與陰性對照組相比，各濃度組

5、的依普拉芬均可增加成骨細(xì)胞培養(yǎng)液中的NO濃度并促進(jìn) eNOS mRNA的表達(dá)(P<0.01)。其中10-8～10-5mol/L之間作用更為顯著。(4)與假手術(shù)組相比，去卵巢大鼠陰性對照組血清NO、NOS濃度以及股骨eNOS表達(dá)均明顯降低，依普拉芬各劑量組高于陰性對照組，與假手術(shù)組差異無顯著意義。同時低于雌激素組。
　　 結(jié)論：依普拉芬對去卵巢大鼠具有顯著的骨保護(hù)效應(yīng),同時可以促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞的增殖和成骨分化，并存在一定的劑量效應(yīng)