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文檔簡介
1、目的:
建立去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松模型,采用復(fù)方腦復(fù)康、復(fù)方阿司匹林和前兩者組成的四藥復(fù)方對該骨質(zhì)疏松模型進行干預(yù),觀察三組復(fù)方藥物對骨質(zhì)疏松的預(yù)防作用并將其與雌激素替代療法進行比較,探討三組復(fù)方藥物預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用機制及優(yōu)越性。
方法:
4月齡SPF級雌性未交配SD大鼠54只,體重(254±20)g,隨機分為7組,除基礎(chǔ)組6只外,其余每組8只?;A(chǔ)組(BAS):不給藥,實驗開始即處死取材;假手術(shù)組(SHAM
2、)行假手術(shù),給予溶劑對照;其他組均行雙側(cè)卵巢切除術(shù),去卵巢組(OVX)給予溶劑對照;己烯雌酚組(D30)給予己烯雌酚30μg/kg/d;復(fù)方腦復(fù)康組(OVX+P-S)給予復(fù)方腦復(fù)康(康力龍2.15mg/kg/d+腦復(fù)康0.864g/kg/d);復(fù)方阿司匹林組(OVX+A-D10)給予復(fù)方阿司匹林(阿司匹林9mg/kg/d+己烯雌酚10μg/kg/d);四藥復(fù)方組給予(OVX+A-D10+P-S)給予復(fù)方阿司匹林(阿司匹林9mg/kg/d
3、+己烯雌酚10μg/kg/d)和復(fù)方腦復(fù)康(康力龍2.15mg/kg/d+腦復(fù)康0.864g/kg/d)。所有藥物按5ml/kg灌胃給藥,每天一次,連續(xù)90d。所有動物實驗結(jié)束前第14d、13d各行頸部皮下注射四環(huán)素(35mg/kg),作為第1次熒光標(biāo)記,在實驗結(jié)束前第4d、3d各行頸部皮下注射鈣黃綠素(10mg/kg)作為第2次熒光標(biāo)記,以在骨表面形成綠色雙熒光標(biāo)志,兩次熒光標(biāo)記間隔時間為10d。實驗結(jié)束時,心臟取血處死大鼠,取血清及
4、大腦勻漿作生化指標(biāo)檢測;取左側(cè)脛骨和第4腰椎進行骨組織形態(tài)計量學(xué)參數(shù)測量;取左股骨和第5腰椎進行骨密度和生物力學(xué)參數(shù)測量;取左股骨測定羥脯氨酸含量;取子宮行石蠟包埋,HE染色后進行形態(tài)學(xué)分析觀察和子宮內(nèi)膜厚度測量;取主要臟器測定器官指數(shù)。
結(jié)果:
1.去卵巢后大鼠發(fā)生典型骨質(zhì)疏松的變化:
去卵巢后大鼠與假手術(shù)大鼠比較,具有以下特點:
(1)脛骨上段松質(zhì)骨的骨丟失明顯,表現(xiàn)為骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(%Tb
5、.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁數(shù)目(Tb.N)均較假手術(shù)對照組顯著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01),骨小梁分離度(Tb.Sp)顯著增加(P<0.05);熒光周長百分?jǐn)?shù)(%L.Pm)和骨形成率(BFR/TV)也呈顯著增加(P<0.05,P<0.05)。破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分?jǐn)?shù)均顯著升高(P<0.01,P<0.01)。
(2)腰椎松質(zhì)骨的骨丟失明顯,表現(xiàn)為骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(%Tb.Ar)、骨小梁厚度(T
6、b.Th)、骨小梁數(shù)目(Tb.N)均呈現(xiàn)較假手術(shù)對照組顯著降低(P<0.01,P<0.05,P<0.01),骨小梁分離度(Tb.Sp)顯著增加(P<0.01);動態(tài)參數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異。
(3)脛骨中段皮質(zhì)骨靜態(tài)和動態(tài)參數(shù)較假手術(shù)對照組均無統(tǒng)計學(xué)差異。
(4)全股骨骨密度、生物力學(xué)參數(shù)彈性載荷和彎曲能量均較假手術(shù)對照組明顯降低(P<0.05,P<0.05,P<0.05);而腰椎骨密度和生物力學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
7、 (5)腦勻漿生化指標(biāo)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)顯著降低(P<0.05);血清總膽固醇顯著增高(P<0.05),血鈣顯著降低(P<0.05);骨消化液羥脯氨酸含量(Hyp)無統(tǒng)計學(xué)差異。
(6)去卵巢使體重明顯增加(P<0.05),肝指數(shù)、脾指數(shù)、腎上腺指數(shù)、腦指數(shù)和腎指數(shù)均顯著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01)。
(7)去卵巢使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度明顯降低(P<
8、0.01,P<0.01)。
2.己烯雌酚(D30)對去卵巢大鼠的影響
去卵巢后大鼠補充己烯雌酚,與去卵巢大鼠組比較,具有以下特點:
(1)己烯雌酚能有效預(yù)防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松。
?、倜劰巧隙嗡少|(zhì)骨的%Tb.Ar、Tb.N均較去卵巢組顯著增加(P<0.01,P<0.01),Tb.Sp則顯著降低(P<0.01);而%L.Pm顯著降低(P<0.05),其余動態(tài)指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異。破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分
9、數(shù)均顯著降低(P<0.01,P<0.01)。
?、谘邓少|(zhì)骨的%Tb.Ar、Tb.N均較去卵巢組顯著增加(P<0.05,P<0.05),Tb.Sp則顯著降低(P<0.05);而%L.Pm顯著降低(P<0.05),其余動態(tài)指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異。
?、勖劰侵卸纹べ|(zhì)骨靜態(tài)參數(shù)改變無統(tǒng)計學(xué)差異;骨外膜骨形成率(P-MAR)顯著降低(P<0.05)。
?、芄晒枪敲芏?、股骨生物力學(xué)參數(shù)彈性載荷和彎曲能力均顯著增加(P<0.05,
10、P<0.05,P<0.05)。腰椎骨密度和生物力學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
?、莨窍篐yp明顯增加(P<0.05);腦勻漿生化指標(biāo)GSH-PX也顯著增高(P<0.01);血鈣、血磷均有顯著升高(P<0.01,P<0.05),血清堿性磷酸酶(ALP)顯著降低(P<0.05)。
(2)己烯雌酚可使去卵巢大鼠體重顯著降低(P<0.05);腦、肝臟、脾臟、腎上腺和腎臟指數(shù)均顯著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P
11、<0.01,P<0.01)。
(3)己烯雌酚可使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度顯著增加(P<0.01,P<0.01)。
(4)己烯雌酚可有效降低去卵巢大鼠血脂膽固醇,升高甘油三酯水平。己烯雌酚使去卵巢后大鼠血清總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)均顯著降低(P<0.01、P<0.05),而TG顯著增高(P<0.05)。
3.復(fù)方腦復(fù)康(P-S)對去卵巢大鼠的影響:
去卵巢后大鼠補充復(fù)方腦復(fù)康
12、,與去卵巢大鼠組及己烯雌酚組相比較,具有以下特點:
(1)復(fù)方腦復(fù)康能有效預(yù)防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松。
?、倥c去卵巢組比較,復(fù)方腦復(fù)康組脛骨上段松質(zhì)骨的%Tb.Ar、Tb.Th和Tb.N均顯著增加(P<0.05,P<0.01,P<0.05);動態(tài)指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異;破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分?jǐn)?shù)均顯著降低(P<0.01,P<0.01)。與己烯雌酚組相比,復(fù)方腦復(fù)康組Tb.Th顯著增加(P<0.05),動態(tài)指標(biāo)和骨吸收指標(biāo)無統(tǒng)
13、計學(xué)差異。
?、谂c去卵巢組比較,復(fù)方腦復(fù)康組腰椎松質(zhì)骨動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異;與己烯雌酚組相比,復(fù)方腦復(fù)康組Tb.N顯著降低(P<0.05),Tb.Sp顯著增加(P<0.05)。
?、叟c去卵巢組比較,復(fù)方腦復(fù)康組脛骨中段骨內(nèi)膜熒光標(biāo)記周長百分?jǐn)?shù)(%E-L.Pm)顯著降低(P<0.01),其余動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
?、芘c去卵巢組比較,復(fù)方腦復(fù)康組腰椎骨密度、股骨骨密度、股骨斷裂載荷和彈性載荷均顯著增加(P<
14、0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05);與己烯雌酚組相比,復(fù)方腦復(fù)康組斷裂載荷、彈性載荷和彎曲能量均顯著增加(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。
(2)與去卵巢組比較,復(fù)方腦復(fù)康組腦勻漿生化指標(biāo)GSH-PX顯著增高(P<0.01),血鈣和血磷顯著增加(P<0.05,P<0.05),TG和HDL-C顯著降低(P<0.01、P<0.05);與己烯雌酚組相比,復(fù)方腦復(fù)康組超氧化物歧化酶(SOD)顯著增加(P<
15、0.05),血清TC、LDL-C和HDL-C顯著增加(P<0.01,P<0.01,P<0.05),血鈣顯著降低(P<0.05)。
(3)與去卵巢組比較,復(fù)方腦復(fù)康組對體重影響不顯著,肝臟指數(shù)顯著增加(P<0.05);與己烯雌酚組相比,復(fù)方腦復(fù)康組腦、肝臟、脾臟和腎上腺指數(shù)顯著減少(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01)。
(4)與去卵巢組比較,復(fù)方腦復(fù)康使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度顯著增加(P<0.01
16、,P<0.01)。與己烯雌酚組相比,復(fù)方腦復(fù)康組子宮指數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度顯著降低(P<0.01,P<0.05)。
4.復(fù)方阿司匹林(A-D10)對去卵巢大鼠的影響:
去卵巢后大鼠補充復(fù)方阿司匹林,與去卵巢大鼠組及己烯雌酚組相比較,具有以下特點:
(1)復(fù)方阿司匹林能有效預(yù)防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松。
?、倥c去卵巢組比較,復(fù)方阿司匹林組脛骨上段松質(zhì)骨的%Tb.Ar和Tb.N均顯著增加(P<0.01,P<
17、0.01),Tb.Sp顯著減少(P<0.01);動態(tài)指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異;破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分?jǐn)?shù)均顯著降低(P<0.01,P<0.01)。與己烯雌酚組相比,復(fù)方阿司匹林組靜態(tài)指標(biāo)和骨吸收指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異。
?、谂c去卵巢組比較,復(fù)方阿司匹林組腰椎松質(zhì)骨靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異;動態(tài)指標(biāo)%L.Pm、BFR/BS和BFR/TV顯著增加(P<0.05,P<0.05,P<0.05);與己烯雌酚組相比,復(fù)方阿司匹林組%L.Pm、BFR/BS、B
18、FR/BV和BFR/TV顯著增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05)。
?、叟c去卵巢組比較,復(fù)方阿司匹林組脛骨中段骨內(nèi)膜熒光標(biāo)記周長百分?jǐn)?shù)(%E-L.Pm)顯著降低(P<0.05),其余動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
?、軓?fù)方阿司匹林可使去卵巢大鼠股骨骨密度顯著增加(P<0.05);復(fù)方阿司匹林組與去卵巢組比較或者與己烯雌酚組相比,生物力學(xué)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異。
(2)與去卵巢組比較,復(fù)方阿司匹
19、林組腦勻漿生化指標(biāo)GSH-PX顯著增高(P<0.01),單胺氧化酶(MAO)顯著降低(P<0.01);血清TC、TG和LDL-C顯著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01);與己烯雌酚組相比,復(fù)方阿司匹林組TG、LDL-C、Ca和P顯著降低(P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.05),ALP顯著升高(P<0.05)。
(3)與去卵巢組比較,復(fù)方阿司匹林組體重顯著降低(P<0.05),腦、肝臟、脾臟、腎上腺
20、和腎臟指數(shù)顯著增加(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.01);與己烯雌酚組相比,復(fù)方阿司匹林組肝臟和腎上腺指數(shù)顯著減少(P<0.05,P<0.05)。
(4)與去卵巢組比較,復(fù)方阿司匹林組使子宮重量及子宮內(nèi)膜厚度顯著增加(P<0.05,P<0.01)。與己烯雌酚組相比,復(fù)方阿司匹林組子宮指數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度無統(tǒng)計學(xué)差異。
5.四藥復(fù)方(P-S+A-D10)對去卵巢大鼠的影響:
去
21、卵巢后大鼠補充四藥復(fù)方,與去卵巢大鼠組及己烯雌酚組相比較,具有以下特點:
(1)四藥復(fù)方能部分預(yù)防去卵巢大鼠所致的骨質(zhì)疏松。
?、倥c去卵巢組比較,四藥復(fù)方組脛骨上段松質(zhì)骨的Tb.Th和Tb.N均顯著增加(P<0.05,P<0.01),%L.Pm顯著增加(P<0.05),破骨細(xì)胞數(shù)量和周長百分?jǐn)?shù)均顯著降低(P<0.01,P<0.01);與己烯雌酚組相比,四藥復(fù)方組Tb.Th顯著增加(P<0.01),而Tb.Sp顯著減少(
22、P<0.05);%L.Pm和BFR/TV顯著增加(P<0.05,P<0.05)。
?、谂c去卵巢組比較,四藥復(fù)方組腰椎松質(zhì)骨動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異;與己烯雌酚組相比,四藥復(fù)方組Tb.N顯著減小(P<0.05),而Tb.Sp顯著增加(P<0.05); MAR和BFR/BS組顯著增加(P<0.05,P<0.05)。
?、叟c去卵巢組比較,四藥復(fù)方組脛骨中段骨動靜態(tài)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異;與己烯雌酚組相比,四藥復(fù)方組骨外膜礦化沉積率
23、(P-MAR)顯著增加(P<0.05)。
?、芩乃帍?fù)方可使去卵巢大鼠股骨骨密度顯著增加(P<0.05);與去卵巢組相比,四藥復(fù)方組彈性載荷和彎曲能量顯著增高(P<0.05,P<0.05);與己烯雌酚組相比,四藥復(fù)方組彈性載荷和彎曲能量顯著增高(P<0.05,P<0.05)。
(2)與去卵巢組比較,四藥復(fù)方組腦勻漿生化指標(biāo)GSH-PX顯著增高(P<0.01)血清TC、TG和LDL-C顯著降低(P<0.01,P<0.01,
24、P<0.01)。與己烯雌酚組相比,四藥復(fù)方組TG和Ca顯著降低(P<0.01,P<0.05),ALP顯著升高(P<0.05)。
(3)與去卵巢組比較,四藥復(fù)方對大鼠體重影響不顯著,肺臟指數(shù)顯著降低(P<0.05);與己烯雌酚組相比,四藥復(fù)方組腦、肝臟、脾臟、腎上腺、腎臟和肺臟指數(shù)顯著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01)。
(4)與去卵巢組比較,四藥復(fù)方組使子宮重量
25、及子宮內(nèi)膜厚度顯著增加(P<0.05,P<0.01)。與己烯雌酚組相比,四藥復(fù)方組子宮指數(shù)顯著降低(P<0.05)。
結(jié)論:
1.去卵巢可導(dǎo)致典型的高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松,伴隨骨生物力學(xué)性能降低,并造成體重升高,子宮萎縮,血脂紊亂,腦過氧化物酶降低。
2.己烯雌酚可預(yù)防去卵巢導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松,降低骨轉(zhuǎn)換水平,增強骨生物力學(xué)性能,使大鼠體重降低,子宮增厚,血膽固醇降低,但甘油三酯升高,腦過氧化物酶升高。
3
26、.復(fù)方腦復(fù)康可有效預(yù)防去卵巢導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松,抑制骨吸收而不抑制骨形成,增強骨生物力學(xué)性能,對大鼠體重影響不大,子宮刺激作用輕,血甘油三酯降低,腦過氧化物酶水平升高。
4.復(fù)方阿司匹林可有效預(yù)防去卵巢導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松,抑制骨吸收而不抑制骨形成,骨生物力學(xué)性能無統(tǒng)計學(xué)差異,大鼠體重減輕,子宮增厚,血膽固醇和甘油三酯降低,腦過氧化物酶水平升高,單氨氧化酶水平降低。
5.四藥復(fù)方可部分預(yù)防去卵巢導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松,抑制骨吸收而不抑
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