阿膠強(qiáng)骨口服液對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松模型治療作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:觀察阿膠強(qiáng)骨口服液對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的影響及機(jī)制,并探討阿膠強(qiáng)骨口服液對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的治療作用。
   方法:(1)六月齡雌性SD大鼠16只,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為二組:假手術(shù)組和去卵巢組,每組8只。3個(gè)月后取材檢測(cè):兩側(cè)股骨,常規(guī)HE染色,光鏡下觀察骨組織結(jié)構(gòu);使用雙能X線骨密度儀測(cè)量大鼠股骨頭及粗隆部BMD;生物力學(xué)測(cè)定儀上測(cè)定最大載荷和最大壓應(yīng)變。(2)6月齡SD大鼠36只,隨機(jī)分為A組,B組,C組,每組12

2、只。6個(gè)月后取材檢測(cè)。采用ELISA法對(duì)去卵巢大鼠血清25-OH-VD3和1,25-(OH)2-VD3進(jìn)行研究,用熒光定量PCR對(duì)腎臟VDR基因進(jìn)行定量分析。(3)6月齡SD大鼠36只,隨機(jī)分為A組,B組,C組,每組12只。6個(gè)月后取材檢測(cè)。采用熒光定量PCR對(duì)I型膠原基因進(jìn)行定量分析,采用免疫印跡法對(duì)I型膠原蛋白進(jìn)行分析。(4)六月齡雌性SD大鼠16只,其中12只用于灌胃制備含藥血清和對(duì)照血清,4只用于提取細(xì)胞。將細(xì)胞分為兩組,即含藥

3、血清組和對(duì)照血清組。M組的細(xì)胞用含藥血清培養(yǎng)基培養(yǎng),C組的細(xì)胞用對(duì)照血清培養(yǎng)基培養(yǎng),兩組中均加入25ng/ul的M-CSF和RANKL各1ul。分別取干預(yù)一周的兩組細(xì)胞進(jìn)行TRAP染色。采用噻唑鹽比色法測(cè)增殖情況。通過(guò)Annexin V聯(lián)合PI試劑盒采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
   結(jié)果:(1)造模情況:1. 假手術(shù)組大鼠股骨骨小梁豐富、連續(xù)、致密;去卵巢組大鼠骨小梁排列稀疏、部分?jǐn)嗔选⒐切×浩骄鶎挾茸冃?、骨小梁間距增大。平

4、均骨小梁寬度:假手術(shù)組為71.23±10.62,去卵巢組為52.65±12.17,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異;平均骨小梁間距:假手術(shù)組為83.68±3.69,去卵巢組為105.32±3.55,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異;2. 假手術(shù)組和去卵巢組大鼠股骨頭生物力學(xué)結(jié)果:最大壓應(yīng)力:假手術(shù)組為345.87±32.16,去卵巢組為266.13±30.05,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異;最大載荷:假手術(shù)組為39.13±4.28,去卵巢組為32.39±4.37,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯

5、著性差異;3.股骨頭骨密度:假手術(shù)組為0.316±0.015,去卵巢組為0.281±0.017,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異。(2)C組血液中25-羥基維他命D3 濃度和1,25-羥基維他命D3濃度與B組比較明顯增高,其中對(duì)25-羥基維他命D3濃度增高尤為明顯,已接近A組,差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組與C組相比,說(shuō)明擴(kuò)增效率的差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)C組I型膠原蛋白與B組比較明顯增高,已接近A組,差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。I型膠原基因熒光定量

6、PCR結(jié)果,B組與C組相比,說(shuō)明擴(kuò)增效率的差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)1.破骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察:破骨細(xì)胞胞漿飽滿,內(nèi)含許多空泡結(jié)構(gòu),核大呈圓形,核仁清晰??梢?jiàn)少量融合細(xì)胞,含有幾個(gè)胞核,胞體大,胞漿豐富;2. TRAP染色結(jié)果顯示破骨細(xì)胞胞漿陽(yáng)性,呈酒紅色,核呈陰性;3.阿膠強(qiáng)骨口服液對(duì)破骨細(xì)胞增殖率的影響:OD值值分別為0.1825±0.03641和0.1819±0.03532,統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異;4.阿膠強(qiáng)骨口服液對(duì)破骨細(xì)胞凋亡率

7、的影響:凋亡率分別為89.51±1.62%和63.79±0.87%,統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異。
   結(jié)論:(1)實(shí)驗(yàn)SD大鼠,在摘除雙側(cè)卵巢3月后成功復(fù)制出了絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型。(2)阿膠強(qiáng)骨口服液可以增加去卵巢大鼠血液中25-OH-VD3、1,25-(OH)2-VD3的濃度,同時(shí)上調(diào)骨骼中VDR的表達(dá)水平。(3)阿膠強(qiáng)骨口服液可以上調(diào)骨組織Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)水平,同時(shí)顯著提高Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)含量,這是阿膠強(qiáng)骨口服液治療骨質(zhì)

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