中藥中馬兜鈴酸含量的HPLC測(cè)定及復(fù)方減毒效果的MLA試驗(yàn)研究.pdf

1、含馬兜鈴酸(Aristolochic Acid,AA)中藥引起的馬兜鈴酸腎病(Aristolochic Acid Nephropathy,AAN)這一現(xiàn)象已引起了人們的廣泛關(guān)注,而目前我國(guó)尚缺乏一套從細(xì)胞和分子遺傳突變水平來(lái)評(píng)價(jià)含馬兜鈴酸中藥毒性作用的檢測(cè)體系。因此,本課題希望通過(guò)研究摸索出一套檢測(cè)含馬兜鈴酸中藥毒性作用的體系。為了建立從提取到檢測(cè)含馬兜鈴酸中藥毒性作用的整套流程,本課題首先采用高效液相色譜(High Performan

2、ce Liquid Chromatography,HPLC)測(cè)定了八種中藥中馬兜鈴酸的含量,并選定其中馬兜鈴酸含量較高的單方青木香和復(fù)方龍薈丸。然后利用“小鼠淋巴瘤細(xì)胞L5178Y/TK+/-致突變?cè)囼?yàn)”(L5178Y/TK+/- Mouse Lymphoma Mutation Assay,MLA簡(jiǎn)稱(chēng)小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn))檢測(cè)選定的這兩種中藥的細(xì)胞毒性和遺傳毒性作用。從馬兜鈴酸含量的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看:八種中藥中馬兜鈴酸含量在0～4.72 mg

3、/g,其中單方中藥中青木香的馬兜鈴酸含量最高(3.11512 mg/g),而復(fù)方中龍薈丸最高(4.72044 mg/g)。該方法不僅簡(jiǎn)便,結(jié)果穩(wěn)定,分離效果好,同時(shí)回收率、精密度、重現(xiàn)性均達(dá)到滿(mǎn)意效果。小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果表明,馬兜鈴酸濃度分別為0、25、50、100、200μg/mL,單方青木香提取液對(duì)小鼠淋巴瘤L5178Y3.7.2c-tk+/-細(xì)胞(簡(jiǎn)稱(chēng)小鼠淋巴瘤細(xì)胞)造成的tk基因突變頻率為:115.3×10-6、303.1×

4、10-6、632.4×10-6、1346.2×10-6、2972.3×10-6;而復(fù)方龍薈丸提取液的結(jié)果依次為:115.3×10-6、122.9×10-6、237.2×10-6、586.7×10-6、1150.8×10-6。相對(duì)存活率(RS),相對(duì)懸浮增長(zhǎng)率(RSG),相對(duì)總增長(zhǎng)率(RTG)這些細(xì)胞毒性指標(biāo)都與青木香和龍薈丸提取液中馬兜鈴酸濃度呈反向關(guān)系。這些說(shuō)明青木香和龍薈丸對(duì)小鼠淋巴瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性和遺傳毒性作用都隨提取液中馬兜鈴酸