hplc法測(cè)定復(fù)方血竭凝膠中阿魏酸的含量

1、<p>　　HPLC法測(cè)定復(fù)方血竭凝膠中阿魏酸的含量</p><p>　　作者：劉超英,劉丹,張小燕,韓建偉</p><p>　　【摘要】 目的 建立復(fù)方血竭凝膠中阿魏酸的含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜(HPLC)法,色譜柱為ZORBAX SB-C18(5 μm,4.6 mm×250 mm),以甲醇-0.3%冰醋酸(35∶65)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm,

2、柱溫35 ℃,流速1.0 mL/min。結(jié)果 阿魏酸在0.031～0.310 μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系(r＝0.999 9),平均回收率為95.82%(RSD＝0.63%)。結(jié)論 此方法操作簡(jiǎn)便、可靠,重復(fù)性好,專屬性強(qiáng),能有效控制該制劑的質(zhì)量。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 復(fù)方血竭凝膠；阿魏酸；高效液相色譜法；含量測(cè)定</p><p>　　Abstract：Objective To

3、establish a method for determination of ferulic acid in Compound Xuejie Gels. Methods HPLC method was carried out on Zorbax SB-C18 (5 μm, 4.6 mm×250 mm), with detection wavelength at 320 nm. The mobile phase was com

4、posed of methanol-0.3% aqueous acetic acid (35∶65), the column temperature was 35 ℃ and the flow rate was 1.0 mL/min. Results The calibration curve was linear in the range of 0.031～0.310 μg (r＝0.999 9). The average recov

5、ery was 95.82% (RSD＝0.63%). Conclusion This</p><p>　　Key words：Compound Xuejie Gels；Ferulic acid；HPLC；content determination</p><p>　　復(fù)方血竭凝膠由延胡索、血竭、乳香、當(dāng)歸、冰片5味中藥組成,具有活血散瘀、消腫止痛、生肌止癢的功效。本試驗(yàn)選用阿魏酸作為指標(biāo)

6、成分,參考有關(guān)文獻(xiàn)[1],建立了測(cè)定其含量的方法。通過(guò)方法學(xué)考察,本方法穩(wěn)定性好,專屬性強(qiáng),可作為復(fù)方血竭凝膠的質(zhì)量控制方法之一。</p><p><b>　　1 儀器與試藥</b></p><p>　　Agilent 1100系列高效液相色譜儀(四元泵,美國(guó))；超聲波清洗器(HJ69-10L,北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司)。阿魏酸對(duì)照品(批號(hào)0726-200208,中

7、國(guó)藥品生物制品檢定所提供)；復(fù)方血竭凝膠(本院自制)。甲醇(分析純,上海振興化工一廠),其他試劑均為分析純,水為重蒸餾水。</p><p><b>　　2 方法與結(jié)果</b></p><p><b>　　2.1 色譜條件</b></p><p>　　色譜柱：ZORBAX SB-C18(5 μm,4.6 mm×

8、250 mm)；流動(dòng)相：甲醇-0.3%冰醋酸(35∶65)；檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL/min。阿魏酸對(duì)照品溶液及供試品溶液均在11 min左右出現(xiàn)特征吸收峰,陰性對(duì)照在阿魏酸位置處無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。</p><p>　　2.2 溶液的制備</p><p>　　2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 </p><p>　　精密稱取減壓干燥48

9、 h的阿魏酸對(duì)照品1.55 mg于50 mL量瓶中,加70%甲醇溶解定容,制成1 mL含阿魏酸31 μg的對(duì)照品溶液。</p><p>　　2.2.2 供試品溶液的制備 </p><p>　　取復(fù)方血竭凝膠約2 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入HCl-90%甲醇(1∶99)20 mL,稱定重量,超聲處理(功率250 W,頻率40 kHz)30 min,放冷,再稱定重量,用HCl-9

10、0%甲醇(1∶99)補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5 mL,置分液漏斗中,用乙酸乙酯分次振搖提取4次(10、10、5、5 mL)。合并乙酸乙酯液,水浴蒸干,殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL棕色容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。</p><p>　　2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 </p><p>　　按處方比例和制備工藝制備不含當(dāng)歸的陰性樣品,按供試品溶液

11、制備方法制得陰性對(duì)照溶液。</p><p>　　2.3 線性關(guān)系及檢出限</p><p>　　精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1、2、3、4、5 mL分別置10 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。按上述色譜條件依次進(jìn)樣20 μL,以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程：Y＝3 376.5X－4.078 5,r＝0.999 9,表明阿魏酸在0.03

12、1～0.310 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。同時(shí)將對(duì)照品溶液稀釋后進(jìn)樣,檢得最低檢測(cè)限為5.95 μg/mL。</p><p>　　2.4 精密度試驗(yàn)</p><p>　　吸取阿魏酸對(duì)照品溶液10 μL,重復(fù)測(cè)定6次,RSD＝1.57%。</p><p>　　2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)</p><p>　　吸取同一供試品溶液10 μL,分別于0、1、

13、2、4、6、8 h進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,RSD＝1.90%。表明至少8 h內(nèi)供試品溶液仍保持穩(wěn)定。</p><p>　　2.6 重復(fù)性試驗(yàn)</p><p>　　精密稱取同一批樣品6份,按供試品溶液制備方法制備,測(cè)定,計(jì)算含量分別為0.082 0、0.079 1、0.081 9、0.079 2、0.081 1、0.079 9 mg/g,平均含量為0.080 5 mg/g,RSD＝1.71%。&

14、lt;/p><p>　　2.7 加樣回收率試驗(yàn)</p><p>　　精密稱取已知含量的同批樣品6份,分別加入阿魏酸對(duì)照品溶液(31 μg/mL)4、5、6 mL各2份,按供試品溶液制備方法制備后,HPLC測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）</p><p>　　2.8 樣品含量測(cè)定</p><p>　　取樣品

15、3批,按照供試品溶液制備方法制備后,HPLC測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表2。表2 復(fù)方血竭凝膠3批樣品含量測(cè)定結(jié)果(略)</p><p><b>　　3 討論</b></p><p>　　阿魏酸對(duì)光熱不穩(wěn)定,因此,在分析過(guò)程中樣品宜放置于棕色容量瓶并避光保存,且不宜長(zhǎng)時(shí)間高溫加熱。</p><p>　　在選擇樣品處理方法時(shí),本試驗(yàn)對(duì)比了4種提取溶劑：甲醇

16、、HCl-甲醇(1∶99)、鹽酸-50%甲醇(1∶99),鹽酸-90%甲醇(1∶99),結(jié)果鹽酸-90%甲醇(1∶99)超聲后,樣品溶液澄清,易過(guò)濾,濾液經(jīng)乙酸乙酯萃取后測(cè)定,雜質(zhì)峰少,提取率高,是從復(fù)方血竭凝膠中提取阿魏酸較理想的溶劑。本法操作簡(jiǎn)便、可靠,重復(fù)性好,專屬性強(qiáng),能有效控制該制劑的質(zhì)量。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>