人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞中Sp1對(duì)KDR轉(zhuǎn)錄表達(dá)的調(diào)控.pdf

1、背景：絨毛膜癌(choriocarcinoma，CC)(簡稱絨癌)是來源于胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞的惡性腫瘤，主要經(jīng)血液播散，轉(zhuǎn)移發(fā)生早且廣泛。目前，致絨癌患者死亡的主要原因之一，就是未能及時(shí)并有效的控制絨癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的發(fā)生和發(fā)展。血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)是最重要的腫瘤血管生成調(diào)控因子之一，通過與其受體激酶功能區(qū)受體(kinase insert domainCoiltaini

2、ng receptor，KDR)結(jié)合，發(fā)揮促進(jìn)腫瘤血管生成的作用，為腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、轉(zhuǎn)移，提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。KDR主要分布在腫瘤區(qū)新生血管內(nèi)皮表面，VEGF通過旁分泌機(jī)制起作用。此外在某些腫瘤細(xì)胞中亦發(fā)現(xiàn)有KDR的表達(dá)，預(yù)示VEGF還存在自分泌調(diào)節(jié)途徑。絨毛膜癌是一個(gè)高度血管化的惡性腫瘤，已證實(shí)VEGF在其中表達(dá)，但KDR表達(dá)情況如何，尚未見系統(tǒng)研究。而特化蛋白1(special protein 1，Sp1)是一種普遍存在于哺乳

3、動(dòng)物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子， KDR在轉(zhuǎn)錄水平上可能受其調(diào)節(jié)。 目的：檢測(cè)人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞中Sp1和KDR mRNA表達(dá)，并以Sp1反義寡核苷酸干擾JEG-3細(xì)胞，證明KDR在轉(zhuǎn)錄水平上受Sp1的調(diào)控，通過探討影響KDR表達(dá)的因素，為臨床抗絨癌轉(zhuǎn)移治療提供新的思路。 方法：逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)JEG-3細(xì)胞中Sp1和KDR mRNA的表達(dá)情況。通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑lipofectamine<'TM>

4、～2000，將Sp1反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染到JEG-3細(xì)胞中，Sp1反義寡核苷酸終濃度分別為0.1 μ mol/L、0.2 μ mol/L、0.3 μ mol/L、0.4 μ mol/L、0.5 μmol/L，同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組和終濃度為0.5 μ mol/L的正義序列對(duì)照組。RT-PCR檢測(cè)不同組別JEG-3細(xì)胞中Sp1、KDR mRNA的表達(dá)，圖象分析系統(tǒng)分析擴(kuò)增條帶光密度值，以GAPDH為內(nèi)參，計(jì)算mRNA相對(duì)表達(dá)水平。 結(jié)果：

5、 (1)在JEG-3細(xì)胞中檢測(cè)到Sp 1和KDR mRNA的表達(dá)。 (2)Sp1反義寡核苷酸對(duì)JEG-3細(xì)胞Spl和KDR mRNA的表達(dá)均有明顯抑制作用，與正義序列組和空白對(duì)照組比較有顯著差異(P<0.05)。 (3)用0.1 μ mol/L、0.2 μ mol/L、0.3 μ mol/L、0.4 μ mol/L、0.5μ mol/L 5個(gè)濃度的Sp1反義寡核苷酸處理24小時(shí)后，Sp1 mRNA、KDRmRNA

6、的表達(dá)均受到抑制，其中以0.5 μ mol/L的Sp1反義寡核苷酸濃度抑制作用最明顯，且Sp1反義寡核苷酸對(duì)JEG-3細(xì)胞Sp1、KDR表達(dá)的抑制作用呈濃度依賴性(P<0.05)。 (4)正義序列和空白對(duì)照的JEG-3細(xì)胞中Sp1、KDR的表達(dá)沒有顯著差異(P>0.05)。 結(jié)論： (1)人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞中有血管內(nèi)皮生長因子受體KDR的表達(dá)，說明VEGF不僅通過調(diào)節(jié)血管新生促進(jìn)腫瘤生長，還可能直接作用于腫