TGF-β1-Samd3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化中的作用.pdf

1、目的:探討TGF-β1對(duì)體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)化的影響及其Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng)的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞,傳代接種后分別加入1ng·ml-1、5ng·ml-1、10ng·ml-1的TGF-β1。為觀察TGF-β1對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響,應(yīng)用BrdU標(biāo)記增殖細(xì)胞,GFAP標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞以及DAPI標(biāo)記細(xì)胞核進(jìn)行三染,應(yīng)用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測細(xì)胞增殖率。為觀察TGF-β1對(duì)星形膠質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響,應(yīng)用Tau

2、1標(biāo)記神經(jīng)元,GFAP標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞以及DAPI標(biāo)記細(xì)胞核進(jìn)行三染,觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。采用SiRNA基因沉默技術(shù),干擾Smad3基因的表達(dá),RT-PCR驗(yàn)證沉默效果,應(yīng)用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)觀察干擾TGF-β1-Smad3通路后對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化的影響。
　　結(jié)果:(1)TGF-β1對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖有明顯促進(jìn)作用,1ng·ml-1組增殖率為(48.19±3.49)％;5ng·ml-1組增殖率為(50.92±4.71)%;1

3、0ng·ml-1組增殖率為(62.39±4.14)%,與對(duì)照組(34.73±1.74)%相比明顯增高(P<0.05),并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。成功沉默Smad3基因后,Smad3-SiRNA-1組增殖率(17.33±1.83)%,Smad3-SiRNA-3組增殖率(15.83±2.10)%,與對(duì)照組增殖率(35.50±3.17)%相比,明顯減低(P<0.05),而Smad3-SiRNA-2組增殖率(32.00±1.73)%與對(duì)照組相比,

4、無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。成功沉默Smad3基因能阻斷TGF-β1對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用,TGF-β1+Smad3-SiRNA-1組增殖率(24.55±2.33)%、TGF-β1+Smad3-SiRNA-3組增殖率(27.83±2.39)%與對(duì)照組增殖率(36.40±3.16)%及10ng·ml-1TGF-β1組增殖率(58.64±5.32)%相比顯著減低(P<0.05);而TGF-β1+Smad3-SiRNA-2組增殖率(46.70±3.8

5、3)%與10ng·ml-1TGF-β1組相比,結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但與對(duì)照組相比增殖率明顯增高(P<0.05)。(2)TGF-β1抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞向神經(jīng)元前體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,5ng·ml-1 TGF-β1組轉(zhuǎn)化率(7.49±1.50)%,10 ng·ml-1 TGF-β1組轉(zhuǎn)化率為(6.53±1.51)%,與對(duì)照組(13.75±1.88)%相比轉(zhuǎn)化率降低(P<0.05),1ng·ml-1 TGF-β1組轉(zhuǎn)化率為(12.57±1.88)%,與對(duì)

6、照組比較,結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。成功沉默 Smad3基因后,Smad3-SiRNA-1轉(zhuǎn)化率(16.34±1.42)%,Smad3-SiRNA-3轉(zhuǎn)化率(16.36±1.29)%,與對(duì)照組轉(zhuǎn)化率(13.37±2.05)%相比明顯升高(P<0.05),而Smad3-SiRNA-2轉(zhuǎn)化率(12.19±1.73)%與對(duì)照組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。成功沉默Smad3基因能阻斷TGF-β1對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的抑制作用,TGF-β1+Smad3-SiRNA

7、-1組轉(zhuǎn)化率(16.35±1.36)%、TGF-β1+Smad3-SiRNA-3組轉(zhuǎn)化率(16.64±1.36)%與對(duì)照組轉(zhuǎn)化率(13.08±2.17)%及10ng·ml-1TGF-β1組轉(zhuǎn)化率(7.17±1.41)%相比明顯增高(P<0.05);而TGF-β1+Smad3-SiRNA-2組轉(zhuǎn)化率(7.74±1.60)%與10ng·ml-1 TGF-β1組相比,結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但與對(duì)照組相比轉(zhuǎn)化率降低(P<0.05)。
　　結(jié)論