靶內(nèi)注射γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體制-1小干擾RNA對大鼠神經(jīng)病理性痛的影響.pdf

1、目的:在體篩選出一條對γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-1(γ-aminobutyric acidtransporter-1,GAT-1)基因干擾效率最高的小干擾RNA(small interferingRNA,siRNA)。進(jìn)而將篩選出的干擾效率最高的siRNA鞘內(nèi)注射入神經(jīng)病理性痛大鼠,觀察鞘內(nèi)注射GAT-1 siRNA對神經(jīng)病理性痛大鼠的影響。
　　 方法:1.根據(jù)查得的大鼠GAT-1蛋白在GenBank中的基因序列,由百奧生物利技(南

2、通)有限公司設(shè)計合成3條GAT-1 siRNA(GAT-1 siRNA-1,GAT-1 siRNA-2,GAT-1 siRNA-3)。雄性SD大鼠坐骨神經(jīng)結(jié)扎1天后,鞘內(nèi)注射GAT-1 siRNA與載體LipofectamineTM2000(lipo2000)混合液,注射劑量為2μg·d-1。連續(xù)鞘內(nèi)注射3天后,取大鼠脊髓背角Western blot檢測GAT-1蛋白表達(dá)的變化;
　　 2.實驗分3組:GAT-1 siRNA組、

3、MS siRNA組和載體組。將篩選的干擾效率最高的GAT-1 siRNA-3+lip02000(GAT-1 siRNA組)和MS siRNA+lip02000(MS siRNA組)鞘內(nèi)注射入坐骨神經(jīng)結(jié)扎后大鼠,2μg/天、連續(xù)3天;載體組只鞘內(nèi)注射lipo2000。分別于鞘內(nèi)注射后第1、3、5、7、10天檢測大鼠機(jī)械縮足反射閾值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和熱縮足反射潛伏期(thermal

4、withdrawallatency,TWL)的變化,并于各時間點取大鼠脊髓檢測大鼠脊髓背角GAT-1蛋白表達(dá)量的變化。
　　 結(jié)果:1.所設(shè)計合成的3條GAT-1 siRNA中,與對照組DEPC水組比,GAT-1siRNA-1的RNA干擾效率約為35％;GAT-1 siRNA-3能產(chǎn)生約50％的RNA干擾效果,而GAT-1 siRNA-2組和陰性對照siRNA組與DEPC水組間并沒有差別。
　　 2.鞘內(nèi)注射GAT-1

5、siRNA-3后,與載體組比,大鼠脊髓背角神經(jīng)元GAT-1蛋白表達(dá)約減少50％(P＜0.01);MS siRNA組與載體組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.鞘內(nèi)注射GAT-1 siRNA-3后,與載體組比,大鼠機(jī)械縮足反射閾值增加、熱縮足反射潛伏期延長;MS siRNA組與載體組比較,大鼠機(jī)械縮足反射閾值和熱縮足反射潛伏期差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:1.鞘內(nèi)注射GAT-1 siRNA能有效減少大鼠脊