抵抗素在川崎病患兒冠狀動脈損傷中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分血清抵抗素水平與川崎病的相關(guān)性研究
　　目的:川崎病是一種急性發(fā)熱性疾病，主要發(fā)生在嬰幼兒及年齡小的兒童，常伴有冠狀動脈損傷。由于15％-25％的患兒有發(fā)生冠狀動脈瘤的危險，所以近年來引起了兒科醫(yī)生的極大關(guān)注。抵抗素是新近發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細(xì)胞來源的肽類，屬于一類富含半胱氨酸殘基的分泌性蛋白家族，有研究發(fā)現(xiàn)抵抗素可能參與了炎癥過程，且與冠脈動脈鈣化，粥樣硬化等疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因以，本研究探討血清抵抗素水平與川崎病患兒及

2、其發(fā)生冠脈動脈瘤的相關(guān)性。
　　方法:用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測了165例兒童血清抵抗素水平，并將其分為4組:健康對照組(n=85)，無冠脈動脈損傷的川崎病患兒組(N=41)，伴冠脈擴(kuò)張的川崎病患兒組(N=31)，并發(fā)冠狀動脈瘤的川崎病患兒組(N=8)。同時統(tǒng)計其血液學(xué)指標(biāo)，包括血白細(xì)計數(shù)(WBC)，紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)，血紅蛋白水平(HB)，紅細(xì)胞壓積(Hct)，血小板計數(shù)，C-反應(yīng)蛋白(CRP)和紅細(xì)胞沉降率(ESR)。
　

3、　結(jié)果:與正常對照組及川崎病患兒其他組相比，伴有冠肪動脈瘤的川崎病患兒血清抵抗素水平明顯的升高，此外血紅蛋白水平明顯降低;且在患兒組，血清抵抗素水平與其CRP水平呈顯著正相關(guān)關(guān)系，而與患兒紅細(xì)胞水平呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:抵抗素和血紅蛋白可能與川崎病患兒冠狀動脈瘤的發(fā)生有關(guān)，血清抵抗素的表達(dá)上調(diào)可能與川崎病急性期的炎癥因子增加有關(guān)。
　　第二部分抵抗素基因啟動子-420C/G多態(tài)性與兒童川崎病的相關(guān)性研究
　　目的:川崎

4、病(KD)是一種小兒全身性血管炎，通常伴發(fā)冠狀動脈病變(CAL)。抵抗素為近年來發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細(xì)胞來源的肽類，可能與炎癥反應(yīng)及冠脈動脈疾病的發(fā)生密切相關(guān)。-420C＞G多態(tài)性位點(diǎn)位于抵抗素基因（RETN）啟動子區(qū)域，新近研究顯示該區(qū)位點(diǎn)多態(tài)性在炎癥發(fā)生及心血管疾病中起到了重要作用。然而，RETN啟動子多態(tài)性與川崎病之間的關(guān)聯(lián)尚不清楚。故本研究擬探討抵抗素基因多態(tài)性（-420C/G）與兒童川崎病易感性及其臨床特征的相關(guān)性。
　　方法

5、:共計91名川崎病患兒，115名正常對照組兒童納入本研究。依照診斷標(biāo)準(zhǔn)將川崎病患兒分為了完全性(cKD)和不完全性川崎病(iKD)。采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF)進(jìn)行抵抗素啟動子基因多態(tài)性分型。采用夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)對所有血清樣本抵抗素蛋白濃度進(jìn)行測定。
　　結(jié)果:KD組和健康對照組抵抗素基因(-420C＞G)的基因型和其等位基因頻率進(jìn)行了比較，然而差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。此外，

6、該基因位點(diǎn)多態(tài)性與川崎病的CALS的發(fā)生也無明顯差異。然而，G等位基因的頻率在iKD組明顯高于cKD組(P＜0.05)，GG基因型也在iKD組顯著增加(P＜0.05)。KD組血清抵抗素水平明顯高于對照組(P＜0.05)。與基因型CC和CG和相比，GG基因型KD患兒血清抵抗素水平較高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:本研究結(jié)果表明，抵抗素可能在KD的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用，位于RETN基因啟動子的-420C＞G基因多態(tài)性與兒童川崎病無明

7、顯相關(guān)，然而該位點(diǎn)等位基因G及GG基因型有助于不完全性川崎病的診斷。
　　第三部分 MAPKs信號通路在介導(dǎo)抵抗素致人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌MMP-9、TIMP-1中的作用研究
　　目的:抵抗素為脂肪細(xì)胞特異性分泌因子，可能與炎癥和心血管疾病的發(fā)生相關(guān)。本課題組前期研究表明血清抵抗素水平在川崎病患兒明顯升高，并與冠狀動脈瘤的發(fā)生密切相關(guān);但其致冠脈損傷的機(jī)制尚不清楚?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在KD患兒的炎癥反應(yīng)及血管損

8、傷中起到了關(guān)鍵作用。因此，本課題提出假設(shè)，抵抗素可能對內(nèi)皮細(xì)胞MMP-9及金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP-1）的有調(diào)控作用，并進(jìn)行機(jī)制的探討。
　　方法:用人重組抵抗素處理人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HCAECs)。用RT-PCR方法檢測細(xì)胞MMP-9和TIMP-1的表達(dá)，用ELISA法測定MMP-9和TIMP-1蛋白表達(dá)。用 Western印跡分析ERK1/2，P38MAPK，JNK的總蛋白及磷酸化蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:抵抗素可刺