進(jìn)行性斑狀色素減少癥致病菌分子生物學(xué)鑒定及發(fā)病機(jī)制初步探討.pdf

1、背景:進(jìn)行性斑狀色素減少癥(progressive macular hypomelanosis,PMH)是一種易被誤診的色素減退性皮膚病,其臨床特征為軀干部對(duì)稱出現(xiàn)邊界不清的圓形、橢圓形色素減退斑,并常于軀干中線處融合成片狀。它不癢不痛也無(wú)炎癥。20世紀(jì)80年代,為了描述一種發(fā)生于法國(guó)人身體上的色素紊亂皮膚病,Guillet等人首次提出了進(jìn)行性斑狀色素減少癥,世界各地陸續(xù)均有報(bào)道,近年來(lái)國(guó)內(nèi)分別以“花斑癬樣色素減退”、“青少年特發(fā)性淺色

2、斑”進(jìn)行過(guò)報(bào)道。但目前缺乏公認(rèn)的診斷標(biāo)準(zhǔn),且該病的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,主要由以下四種假說(shuō):①基因‘融合’學(xué)說(shuō)②遺傳學(xué)說(shuō)③真菌感染學(xué)說(shuō)④痤瘡丙酸桿菌學(xué)說(shuō);目前較為認(rèn)可的是痤瘡丙酸桿菌感染學(xué)說(shuō),但國(guó)內(nèi)尚無(wú)對(duì)該病致病菌及作用方式相關(guān)方面的研究。
　　目的:對(duì)進(jìn)行性斑狀色素減少癥(PMH)患者所分離的致病菌進(jìn)行初步鑒定和分析;并將PMH患者皮損分離出的痤瘡丙酸桿菌加入角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCat株)的培養(yǎng)體系,以痤瘡患者皮損處分離出的痤瘡丙酸桿

3、菌及痤瘡丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(NCTC737)做對(duì)照組,來(lái)觀察不同來(lái)源細(xì)菌對(duì)HaCat細(xì)胞株分泌IFN-γ、IL-6、TNF-α細(xì)胞因子的影響,從而推測(cè)可能的發(fā)病機(jī)制。
　　方法:
　　需氧法、厭氧法分別從PMH及痤瘡患者皮損處培養(yǎng)病原菌,應(yīng)用革蘭氏染色、ATB Rapid ID32A系統(tǒng)鑒定及細(xì)菌16sDNA測(cè)序鑒定,將測(cè)序結(jié)果通過(guò)Blast比對(duì),與已知菌進(jìn)行同源性分析,確定細(xì)菌種屬。然后用 DNASTAR建立細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)育樹。

4、取正常人(色素痣患者)皮膚細(xì)菌培養(yǎng)做對(duì)照。
　　將PMH患者皮損分離出的痤瘡丙酸桿菌加入角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCat株)的培養(yǎng)體系,以痤瘡患者皮損處分離出的痤瘡丙酸桿菌及痤瘡丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(NCTC737)做對(duì)照組,來(lái)觀察不同來(lái)源細(xì)菌對(duì)HaCat細(xì)胞株分泌IFN-γ、IL-6、TNF-α細(xì)胞因子的影響。
　　結(jié)果:
　　1.WOOD燈觀察
　　41例PMH患者中35例皮損區(qū)燈下可見局限性點(diǎn)狀紅色熒光,占85.4％,正

5、常皮膚處未見點(diǎn)狀紅色熒光。295例尋常型痤瘡患者中,195例粉刺型中,其中90例可見紅色熒光,183例丘疹型中痤瘡患者中17例可見紅色熒光。
　　2.病原菌的分離培養(yǎng)和鑒定
　　11例PMH患者正常皮膚處取材培養(yǎng),在常規(guī)血平板和厭氧血平板中均未見菌落形成;皮損區(qū)取材作需氧及厭氧培養(yǎng),需氧培養(yǎng)的未發(fā)現(xiàn)有菌落生成,厭氧培養(yǎng)有9例有菌落形成,菌落為圓形、白色、不透明、光滑、不溶血伴有臭味,Wood燈下表現(xiàn)為紅色熒光,革蘭氏染色陽(yáng)性

6、,短棒狀桿菌、無(wú)芽孢、莢膜和鞭毛,經(jīng)ATB Rapid ID32A系統(tǒng)鑒定為痤瘡丙酸桿菌。用厭氧培養(yǎng)法從13例尋常型痤瘡皮損做培養(yǎng),9例培養(yǎng)出革蘭氏陽(yáng)性菌,經(jīng)鑒定7株均為痤瘡丙酸桿菌,1株為腸桿菌,1株為L(zhǎng)ysinibacillus菌。正常人(色素痣患者)皮膚組織培養(yǎng)未見細(xì)菌生長(zhǎng)。3.16sDNA測(cè)序分析及系統(tǒng)發(fā)育樹的建立
　　分別對(duì)來(lái)自面部尋常型痤瘡皮損處的痤瘡丙酸桿菌和PMH背部皮損處培養(yǎng)的痤瘡丙酸桿菌進(jìn)行16sDNA測(cè)序,測(cè)

7、序結(jié)果經(jīng)Blast分析16株為痤瘡丙酸桿菌(9株來(lái)自于PMH患者,7株來(lái)源于痤瘡患者),在NCBI上選取痤瘡丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(DSM16379,NR040847.1)與顆粒丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(DSM20700,NR025276.1)一起做phylogenetic tree和 sequence distances后發(fā)現(xiàn)來(lái)自PMH皮損區(qū)的菌株為痤瘡丙酸桿菌,與痤瘡丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株相似度均大于99.7%。
　　4.痤瘡丙酸桿菌對(duì)HaCat細(xì)胞分

8、泌細(xì)胞因子的影響
　　PMH分離的痤瘡丙酸桿菌與HaCat株共培養(yǎng)分泌的IFN-γ、IL-6量較空白對(duì)照組含量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);較標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTC737組含量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);較痤瘡患者分離出的痤瘡丙酸桿菌株含量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)
　　PMH分離的痤瘡丙酸桿菌與 HaCat株共培養(yǎng)分泌的 TNF-α量較空白對(duì)照組含量降低,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);較標(biāo)準(zhǔn)