致病性溶藻弧菌對(duì)大黃魚粘液的粘附研究.pdf

1、本文測(cè)定了大黃魚表皮、鰓、腸粘液的溶菌活性、LgM含量及蛋白質(zhì)組成等生理生化特性，并研究了粘液對(duì)致病性溶藻弧菌的抗菌活性及溶藻弧菌對(duì)粘液的營(yíng)養(yǎng)利用情況。采用放射性標(biāo)記法、顯微鏡計(jì)數(shù)法研究了不同理化因子及饑餓條件下致病性溶藻弧菌對(duì)大黃魚粘液的粘附作用，同時(shí)比較了溶藻弧菌對(duì)大黃魚不同部位的粘附動(dòng)力學(xué)并初步探討了溶藻弧菌對(duì)粘液的粘附特性，并研究了乳酸、單糖等制劑對(duì)溶藻弧菌粘附的抑制作用。主要結(jié)果如下： 1.大黃魚各部位粘液的生理生化特

2、點(diǎn) 大黃魚鰓粘液對(duì)溶藻弧菌無(wú)抑菌作用，而表皮粘液及前后腸粘液有較弱的抑菌作用，隨著菌濃度的升高，鰓粘液及腸粘液對(duì)溶藻弧菌表現(xiàn)明顯的促生長(zhǎng)作用；表皮粘液表現(xiàn)一定的溶菌活性(83 U·mL<'-1>)而其它粘液無(wú)溶菌活性；大黃魚表皮粘液、鰓粘液的IgM含量明顯高于腸粘液；溶藻弧菌可以將大黃魚粘液作為唯一碳源利用；通過(guò)SDS-PAGE電泳結(jié)果表明大黃魚不同部位粘液的組成不同。 2.溶藻弧菌對(duì)大黃魚各部位粘液的粘附動(dòng)力學(xué)研究

3、 溶藻弧菌對(duì)表皮粘液、鰓粘液及后腸粘液的粘附量趨于飽和的孵育時(shí)間為180min，粘附量分別為7.26×10<'4>、7.57×10<'4>、1.25×10<'5>個(gè)mm<'-2>而對(duì)前腸粘液的粘附量飽和時(shí)間為150min，粘附量為1.33×10<'5>個(gè)mm<'-2>。通過(guò)不同菌濃度條件下的溶藻弧菌對(duì)大黃魚粘液的粘附隋況表明，后腸粘液的粘附位點(diǎn)(em)最多而離散常數(shù)(kχ)最大，對(duì)前腸粘液的親和指數(shù)最大，而對(duì)表皮粘液的親和指數(shù)最低。

4、試驗(yàn)結(jié)果表明病原性溶藻弧菌能夠較好地粘附于大黃魚粘液尤其是腸粘液進(jìn)而為它的進(jìn)一步侵入創(chuàng)造有利條件。 3．不同環(huán)境條件下的溶藻弧菌對(duì)大黃魚的粘附情況 溶藻弧菌的粘附作用與溫度、鹽度、pH等環(huán)境因子有著密切關(guān)系，這些因子的改變能顯著影響其粘附作用。在溫度為25～30℃、pH值5～6時(shí)溶藻弧菌對(duì)大黃魚粘液有較強(qiáng)的粘附作用，在不同鹽度下沒(méi)有明顯的梯度關(guān)系，但在鹽度35時(shí)呈現(xiàn)較強(qiáng)粘附作用，并且溶藻弧菌的粘附依賴于Na<'+>的存在

5、，同時(shí)Ca<'2+>、Mg<'2+>等二價(jià)陽(yáng)離子對(duì)其粘附有一定的促進(jìn)作用。 4．饑餓條件下的溶藻弧菌對(duì)大黃魚粘液的粘附隋況 溶藻弧菌在自然海水條件下進(jìn)行饑餓試驗(yàn)表明，在1～5d內(nèi)總菌數(shù)、活菌數(shù)、菌落形成單位都處于上升趨勢(shì)，而隨著時(shí)間的延長(zhǎng)數(shù)量會(huì)呈緩慢下降趨勢(shì)，但菌落形成單位比總菌數(shù)、活菌數(shù)下降得快，這說(shuō)明溶藻弧菌能在天然海水中長(zhǎng)期饑餓存活并能夠進(jìn)入活的非可培養(yǎng)狀態(tài)，有利于其在海洋中的廣泛分布和長(zhǎng)期存在；但是在饑餓前期(3

6、～10d)溶藻弧菌對(duì)大黃魚表皮粘液的粘附作用就呈明顯降低趨勢(shì)，在第10d時(shí)以基本接近空白值，因此饑餓條件下的溶藻弧菌不能對(duì)大黃魚粘液進(jìn)行有效的粘附。 5．溶藻弧菌對(duì)大黃魚粘液的粘附特性 通過(guò)對(duì)溶藻弧菌進(jìn)行熱處理、蛋白酶、高碘酸及抗血清處理后其粘附作用有不同程度的降低表明溶藻弧菌表面存在某些利于其粘附的結(jié)構(gòu)，如脂多糖、外膜蛋白等糖類及蛋白類結(jié)構(gòu)，同時(shí)還需要鞭毛的運(yùn)動(dòng)作用。通過(guò)對(duì)大黃魚粘液的熱處理及蛋白酶處理后的粘附情況表明