高血壓合并房顫患者抗M2膽堿能受體抗體和抗肌球蛋白重鏈抗體的檢測及其對人心房肌細胞電生理特性影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分高血壓合并房顫患者抗M2膽堿能受體抗體和抗肌球蛋白重鏈抗體的檢測及其臨床意義
  目的:自身抗體在心血管疾病中逐漸被發(fā)現(xiàn),越來越多的證據(jù)表明自身免疫機制參與其中并發(fā)揮著重要作用,在心律失常中也是如此。本實驗的目的是觀察高血壓合并房顫患者自身抗體抗M2膽堿能受體抗體(AAM2R)和抗肌球蛋白重鏈抗體(AAMHC)的變化以及二者與房顫的關(guān)系。
  方法:研究選取高血壓患者共295例,分為高血壓合并房顫組(145例)和高血

2、壓非房顫組(150例)。采集血樣,通過ELISA方法檢測血清中四種自身抗體(AAM2R/AAMHC/AAβ1R/AAANT)的陽性率,并進一步通過單變量和多變量logistic回歸分析自身抗體與房顫的關(guān)系。研究還選取了健康體檢者80例作為正常對照組,與上述兩組高血壓患者比較自身抗體陽性率的差異。
  結(jié)果:與高血壓非房顫組患者相比,高血壓合并房顫組患者自身抗體AAM2R和AAMHC的陽性率顯著升高(AAM2R:44.8%vs13.

3、3%;AAMHC:27.6%vs14.7%;P<0.01),并且自身抗體陽性組患者房顫的發(fā)病率較抗體陰性組也顯著增加(AAM2R:76.5%vs38.1%,P<0.001;AAMHC:64.5%vs45.1%,P<0.01);多變量分析顯示自身抗體是高血壓患者發(fā)生房顫的危險因素和強預(yù)測因子(AAM2R:OR=5.251;AAMHC:OR=2.696)。正常對照組抗體陽性率顯著低于上述兩組高血壓患者(P<0.05)。
  結(jié)論:自身

4、抗體AAM2R和AAMHC與高血壓患者房顫的發(fā)生密切相關(guān),是其重要危險因素和強預(yù)測因子,這可能提示自身免疫參與并促進了房顫的發(fā)生與維持,在其中發(fā)揮了重要作用。
  第二部分抗M2膽堿能受體抗體和抗肌球蛋白重鏈抗體的提取、純化和鑒定
  目的:在高血壓合并房顫患者體內(nèi)自身抗體AAM2R和AAMHC有較高檢出率,本部分實驗主要目的是驗證兩種自身抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合的特異性。
  方法:利用心外科開胸手術(shù)患者(竇性心律)右心耳

5、組織標本,提取組織蛋白和酶解分離單個心房肌細胞。采用鹽析法和親和層析法提純血清中的抗體,利用免疫印跡和細胞免疫熒光技術(shù)驗證自身抗體與相應(yīng)抗原的特異性結(jié)合。
  結(jié)果:自身抗體AAM2R能夠與人心房組織蛋白M2受體和表達于CHO細胞的重組人M2受體特異性結(jié)合,免疫熒光共聚焦顯微鏡下可見AAM2R能與人心房肌細胞膜表面相結(jié)合,抗體陰性患者血清提取物和用抗原中和后的抗體未能結(jié)合;自身抗體AAMHC可與豬心肌肌球蛋白重鏈和人心房肌球蛋白重

6、鏈特異性結(jié)合,并且免疫熒光共聚焦顯微鏡下可見AAMHC能與經(jīng)破膜處理的人心房肌細胞結(jié)合,抗體陰性患者血清提取物和用抗原中和后的抗體未能結(jié)合;自身抗體AAMHC與人β1受體可發(fā)生交叉反應(yīng)。
  結(jié)論:高血壓合并房顫患者血清中存在特異性的自身抗體AAM2R和AAMHC,能夠分別與人心房肌M2受體和肌球蛋白重鏈結(jié)合,且自身抗體AAMHC與β1受體具有交叉反應(yīng)。
  第三部分抗M2膽堿能受體抗體和抗肌球蛋白重鏈抗體對人心房肌細胞復(fù)極

7、電流及動作電位的影響
  目的:自身抗體AAM2R和AAMHC與高血壓患者房顫發(fā)生密切相關(guān),是其重要危險因素和強預(yù)測因子。本部分實驗探討兩種自身抗體對人心房肌細胞復(fù)極化電流和動作電位的影響,以闡明這兩種自身抗體致心律失常的電生理作用機制。
  方法:采集竇性心律心臟外科手術(shù)患者右心耳組織,酶解分離單個心房肌細胞;利用全細胞膜片鉗技術(shù)和穿孔膜片鉗技術(shù)分別記錄兩種自身抗體對心房肌細胞各種復(fù)極化電流(Ikach、ICa-L、Ito

8、1、Ikur)的影響;利用全細胞穿孔膜片鉗電流鉗模式觀察兩種自身抗體對心房肌細胞動作電位的影響。
  結(jié)果:與自身抗體陰性血清提取物相比,自身抗體AAM2R產(chǎn)生了受體激動樣作用,可使心房肌細胞Ikach通道開放,使ICa-L電流減少,并縮短動作電位時程,但對Ito1、Ikur電流無明顯影響,用相應(yīng)M2受體抗原肽段中和抗體后,此作用消失;自身抗體AAMHC對ICa-L、Ito1、Ikur電流及心房肌細胞動作電位均無影響。
  

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