高血壓抗AT1受體抗體陽(yáng)性患者最優(yōu)治療方案研究及其機(jī)制探討.pdf

1、第一部分： 試驗(yàn)假設(shè)：探討抗AT1受體抗體陽(yáng)性高血壓患者使用AT1受體阻滯劑坎地沙坦是否優(yōu)于ACE抑制劑咪達(dá)普利，而在抗AT1受體抗體陰性高血壓患者這一差異可能不明顯或不如抗體陽(yáng)性高血壓患者顯著。從而驗(yàn)證AT1受體阻滯劑具有阻滯抗AT1 受體抗體激動(dòng)劑樣效應(yīng)的作用。 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法：本研究為多中心、隨機(jī)、盲法分組、開(kāi)放、平行對(duì)照臨床試驗(yàn)。經(jīng)篩選后的2級(jí)以上高血壓患者隨機(jī)入組，以ELISA法檢測(cè)抗AT1受體抗體，給予坎地沙

2、坦為基礎(chǔ)或咪達(dá)普利為基礎(chǔ)的階梯治療方案8周，根據(jù)患者抗AT1受體抗體檢測(cè)結(jié)果和藥物治療方案，分為4個(gè)亞組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析：抗AT1受體抗體陽(yáng)性坎地沙坦治療組、抗AT1受體抗體陽(yáng)性咪達(dá)普利治療組、抗AT1受體抗體陰性坎地沙坦治療組、抗AT1受體抗體陰性咪達(dá)普利治療組，比較抗體陽(yáng)性高血壓患者之間及抗體陰性高血壓患者之間坎地沙坦和咪達(dá)普利降壓效果有無(wú)差異。 結(jié)果：在抗AT1抗體陽(yáng)性高血壓患者中，坎地沙坦治療亞組降壓效果優(yōu)于咪達(dá)普利治療亞組

3、（坎地沙坦治療亞組平均血壓降幅35.9/17.6mmHg，咪達(dá)普利治療組平均血壓降幅28.8/13.4mmHg，P<0.01）。而在抗AT1抗體陰性高血壓患者中，坎地沙坦治療亞組平均血壓降幅28.3/15.8mmHg，咪達(dá)普利治療亞組平均血壓降幅26.5/15.4mmHg，無(wú)明顯差異（P>0.05）。咪達(dá)普利治療亞組聯(lián)合用藥明顯多于坎地沙坦治療亞組，（分別為94％和86％，P<0.05)。在基礎(chǔ)水平上，抗AT1受體抗體陽(yáng)性高血壓人群平均

4、收縮壓高于抗AT1受體抗體陰性高血壓人群（分別為160.5±16.5mmHg和156.2±17.7mmHg，P=0.03）。治療結(jié)束后，兩藥物組血壓均控制良好，平均血壓水平無(wú)顯著差異（坎地沙坦藥物治療組平均血壓：127.7/78.4mmHg，咪達(dá)普利藥物治療組平均血壓129.2/79.0mmHg，P>0.05）。并且，抗體滴度高低和坎地沙坦降壓效果無(wú)明顯相關(guān)。 結(jié)論：抗AT1抗體可能與高血壓發(fā)病機(jī)制相關(guān)，在抗AT1抗體陽(yáng)性高血壓

5、患者AT1受體拮抗劑坎地沙坦優(yōu)于血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑咪達(dá)普利，而在AT1-AA陰性高血壓人群中，兩者降壓效果無(wú)差異。為高血壓的個(gè)體化治療提供新策略和循證依據(jù)。 第二部分: 材料和方法：用AT111受體胞外第2肽段合成肽免疫Wista r大鼠，以硫酸銨沉淀法粗提血清抗體后再以親和層析法純化抗體，并以ELISA 法檢測(cè)抗AT111受體抗體，用Bradford的方法對(duì)抗體進(jìn)行定量，SDS-聚丙烯凝膠電泳檢測(cè)抗體純度，以免疫組

6、化方法檢驗(yàn)抗體的免疫活性，以Fluo-3AM作為細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+示蹤劑，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)分離的成年大鼠心室肌細(xì)胞[Ca2+]I的變化，以判斷抗體活性，分Ang II組，抗AT111受體抗體組，抗AT111受體抗體＋氯沙坦組和無(wú)關(guān)Ig G對(duì)照組。 結(jié)果：抗AT1受體抗體在免疫2周開(kāi)始產(chǎn)生，8周時(shí)抗體滴度達(dá)到很高，免疫組化結(jié)果顯示抗體具有較高的免疫活性，從10ml血漿中約提取0.3mg的抗體，SDS－PAGE檢測(cè)結(jié)果提示抗

7、體純度很高，Ang II刺激后引起[Ca2+]I快速上升至峰值（157.4％±52.5％），隨后快速下降；而在抗AT111受體抗體刺激下，呈雙相反應(yīng)，[Ca2+]I 快速上升至峰值（164.0％±34.0％），隨后進(jìn)入平臺(tái)期（與Ang II組相比，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。其效應(yīng)部分被氯沙坦阻斷（79.7％±13.2％，與抗AT1受體抗體組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05）。來(lái)自正常大鼠血清的IgG 對(duì)[Ca2+]I濃度幾乎無(wú)影響（

8、3.8％±0.3％）。 結(jié)論：無(wú)鈣的環(huán)境下，抗AT111受體抗體可以引起大鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]I濃度增加，呈快速的峰值和持續(xù)的平臺(tái)期的雙相反應(yīng)，其后的平臺(tái)期可能與RynR 信使系統(tǒng)激活有關(guān)，其效應(yīng)可被AT1受體阻滯劑氯沙坦所抑制，說(shuō)明其效應(yīng)經(jīng)AT1受體介導(dǎo)；而Ang II引起的[Ca2+]I 濃度升高呈現(xiàn)單峰型，可能與IP3R激活相關(guān)；AT1-AA與Ang II引起[Ca2+]I升高的途徑不同可能在其介導(dǎo)的下游信號(hào)分子表達(dá)