基質(zhì)金屬蛋白酶3高表達在腦動靜脈畸形發(fā)生發(fā)展過程中作用機制的研究.pdf

1、目的：
　　研究基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）在人腦動靜脈畸形(BAVM)組織中的表達情況，通過體外實驗探討MMP-3對人腦微血管內(nèi)皮細胞(HBMEC)的增殖、遷移、侵襲及血管成形能力的影響，最后通過體內(nèi)實驗進一步研究MMP-3表達量對腦血管結(jié)構(gòu)造成的影響，從而探討MMP-3在BAVM發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用機制。
　　方法：
　　MMPs的一些成員在BAVM組織中有異常改變，并與BAVM的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。MMP-3是

2、MMPs家族中的重要成員，在介導(dǎo)和調(diào)節(jié)其他MMPs生成及作用發(fā)揮方面具有十分重要的作用。本課題首先通過免疫組織化學(xué)及Western-blot的方法檢測MMP-3在人BAVM組織中的表達情況。在此基礎(chǔ)上通過體外實驗，即構(gòu)建MMP-3高表達和干擾質(zhì)粒，通過質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的方法篩選出MMP-3穩(wěn)定表達的HBMEC株，再通過CCK8實驗、劃痕實驗及Transwell實驗檢測高表達和干擾MMP-3基因?qū)BMEC增殖、遷移和侵襲能力的影響。之后通過體

3、外構(gòu)建matrigel三維血管形成模型，觀察高表達和干擾MMP-3基因?qū)BMEC血管形成能力的影響。最后，通過體內(nèi)實驗，即首先建立腦內(nèi)靜脈高壓大鼠模型，在此基礎(chǔ)上通過立體定向微量注射轉(zhuǎn)染了MMP-3基因慢病毒載體的HBMEC的方法，人為造成大鼠腦內(nèi)局部MMP-3表達量的變化，最終通過血管內(nèi)注射熒光染料和免疫組化的方法研究MMP-3表達量對大鼠腦血管結(jié)構(gòu)造成的影響。
　　結(jié)果：
　　免疫組織化學(xué)及Western-blot的檢

4、測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在人BAVM組織中，MMP-3高表達于血管內(nèi)皮細胞及基底膜，而正常對照組無明顯表達。RT-PCR技術(shù)進一步證實，在人BAVM組織中，MMP-3基因表達量明顯增加。在體外實驗部分，通過質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的方法成功構(gòu)建了MMP-3高表達和干擾質(zhì)粒，并篩選出了穩(wěn)定表達的HBMEC細胞株。CCK8實驗、劃痕實驗及Transwell的實驗結(jié)果說明MMP-3高表達可增強HBMEC的增殖、遷移和侵襲能力，而matrigel三維血管成形實驗說明MM

5、P-3基因?qū)BMEC的血管形成能力有重要影響。在體內(nèi)實驗部分，通過立體定向微量注射轉(zhuǎn)染了MMP-3基因慢病毒載體的HBMEC的方法，成功建立了腦靜脈高壓-矢狀竇旁腦組織局部MMP-3高表達大鼠模型。對該模型進行的腦血管免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)，MMP-3高表達可以引起腦靜脈高壓-矢狀竇旁腦組織局部MMP-3高表達模型大鼠的腦血管通透性的增加，即腦血管結(jié)構(gòu)和功能的改變。與此同時，MMP-3高表達可以引起腦靜脈高壓大鼠腦微血管周圍的星形膠質(zhì)細胞特