膜Ⅰ型基質(zhì)金屬蛋白酶在人乳牙破牙細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、乳牙根吸收是一種區(qū)別于恒牙的重要生理現(xiàn)象，最終導(dǎo)致乳牙的脫落，多核破牙細(xì)胞(odontoclast)是引起牙體硬組織吸收的主要功能細(xì)胞。破牙細(xì)胞與引起骨吸收的破骨細(xì)胞(osteoclast)在組織學(xué)形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)等方面具有相似性，如胞體大，細(xì)胞器豐富，突觸多，TRAP染色陽性等，并具有硬組織吸收功能，但二者在形態(tài)和功能等方面亦存在差異。 牙齒與骨組織具有相似的物理化學(xué)特點(diǎn)，吸收過程相似，均包括羥基磷灰石脫礦和有機(jī)物降解。研究表明

2、，破骨細(xì)胞或破牙細(xì)胞分泌多種蛋白水解酶，參與調(diào)節(jié)硬組織的吸收。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是一種重要的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白酶，以酶原形式分泌到細(xì)胞外，活化后降解有機(jī)基質(zhì)。目前共發(fā)現(xiàn)20余種MMPs，分為可溶性MMPs(soluble MMPs)和膜型MMPs(membrane—type MMPs，MT—MMPs)。其中MT—MMPs是細(xì)胞膜表面基質(zhì)金屬蛋白酶，共有6種。 膜Ⅰ型基質(zhì)金屬

3、蛋白酶(membrane—typel MMP，MT1-MMP/MMP14)是MT1-MMPs中分布最為廣泛的成員，能夠直接降解多種細(xì)胞外基質(zhì)大分子，并參與激活其他蛋白酶原，引起水解的級聯(lián)效應(yīng)，由于其具有廣泛的功能得到了學(xué)者的關(guān)注。近年研究發(fā)現(xiàn)，MT1-MMP作為重要的蛋白水解酶，在多部位腫瘤、炎癥、創(chuàng)傷愈合、血管形成、卵巢發(fā)育等多種病理和生理組織中高表達(dá)并發(fā)揮功能。在破骨細(xì)胞中，MT1-MMP陽性表達(dá)于細(xì)胞前沿即胞膜突觸處，推測MT1-

4、MMP可能對破骨細(xì)胞向骨吸收表面的遷移、黏附起到重要的作用。由于破牙細(xì)胞與破骨細(xì)胞具有相似的酶化學(xué)特點(diǎn)，推測MT1-MMP可能在體外分離的破牙細(xì)胞中有表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)擬采用酶消化法，分離培養(yǎng)、鑒定成熟的破牙細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和吸收功能的檢測，為牙根吸收機(jī)制的研究提供細(xì)胞模型；采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測體外培養(yǎng)人乳牙破牙細(xì)胞中MT1-MMP蛋白的表達(dá)，分析MT1-MMP在牙根吸收過程中的作用，為探討牙根吸收的機(jī)制提供根據(jù)。 目的：

5、 體外分離、培養(yǎng)成熟的破牙細(xì)胞，并從形態(tài)和功能等方面進(jìn)行細(xì)胞鑒定，建立破牙細(xì)胞體外分離方法，為牙根吸收機(jī)制的研究建立細(xì)胞模型；檢測MT1-MMP在體外分離培養(yǎng)破牙細(xì)胞中的表達(dá)，探討MT1-MMP在乳牙根吸收過程中的作用。 材料和方法： 1.收集中山大學(xué)附屬口腔醫(yī)院兒童口腔科5～7歲因滯留或咬合誘導(dǎo)而需要拔除的無齲及未經(jīng)治療的乳前牙，采用Ⅰ型膠原酶和分散酶聯(lián)合消化的方法分離破牙細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

6、 2.應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測體外培養(yǎng)的破牙細(xì)胞中MT1-MMP蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 體外分離得到的細(xì)胞具有典型的多核巨細(xì)胞特點(diǎn)，細(xì)胞大小不一，形態(tài)不規(guī)則，呈油煎蛋形、梭形、扇形、圓形等，細(xì)胞多突觸，胞核數(shù)目不等(幾個(gè)到十幾個(gè))，細(xì)胞TRAP染色陽性。細(xì)胞與骨磨片共培養(yǎng)3天后，在倒置顯微鏡下觀察可見吸收陷窩的形成，證實(shí)分離培養(yǎng)的細(xì)胞具有硬組織吸收功能。免疫組織化學(xué)顯示，體外分離的破牙細(xì)胞MT1-MMP表達(dá)陽性，分布于