甘藍枯萎病菌1號生理小種效應子的鑒定.pdf

1、尖孢鐮刀菌粘團專化型（Foc）引發(fā)的甘藍枯萎病是我國北方甘藍種植區(qū)內(nèi)普遍發(fā)生的一種維管束病害。該病害傳播迅速，嚴重時甚至會導致毀種絕收，對甘藍種植產(chǎn)業(yè)造成巨大危害。目前，生產(chǎn)上尚未存在安全有效的甘藍枯萎病防治方法，選育抗病品種成為防治該病害的主要途徑。但是，甘藍枯萎病菌致病基因的快速進化使得甘藍抗病性喪失，尤其是效應子基因，其在病原菌與寄主互作的過程中扮演著重要的角色。因此研究甘藍枯萎病菌的致病機理對于防治甘藍枯萎病至關(guān)重要。在本研究中

2、試圖對甘藍枯萎病菌的效應子進行鑒定和功能驗證，最終獲得了以下結(jié)果：
　　1.比較基因組和轉(zhuǎn)錄組分析尖孢鐮刀菌粘團?；?號和2號生理小種的結(jié)果表明，只有17個分泌蛋白基因在1號生理小種中表達。其中3個基因 FOCA1-01935、FOCA1-11385、FOCA1-13811在離體狀況下不表達但在接種寄主中有表達，它們可能是1號生理小種特異的3個分泌蛋白基因。
　　2.收集1號生理小種接種7天后感病植株的傷流液，并用質(zhì)譜測序

3、其中的蛋白。將測序結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)比較，篩選出4個分泌蛋白基因。實時熒光定量檢測這4個基因在離體及寄主中的表達量，得到1個在寄主內(nèi)表達上調(diào)的基因FOCA1-16510。
　　3.將1號生理小種的4個基因FOCA1-01935、FOCA1-11385、FOCA1-13811、FOCA1-16510，采用基因敲除的方法驗證基因功能。以編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶基因作為篩選標記。采用split marker策略和PEG-CaCl2介導原生質(zhì)