基于周仲瑛教授“瘀熱論”的犀角地黃湯防治腦梗死的機制研究.pdf

1、目的:在周仲瑛教授提出的中風病“瘀熱相搏”的病機理論指導下，結合現(xiàn)有的研究基礎，探討犀角地黃湯對“瘀熱”證H型高血壓（血同型半胱氨酸水平-Hcy升高同時伴有高血壓）、大鼠腫瘤壞死因子-(a)(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、血漿溶血磷脂酸(LPA)、磷脂酸(PA)、凝血功能、血液流變學的影響;并且探討犀角地黃湯對內毒素誘導下持續(xù)性大腦中動脈栓塞模型(pMCAO)大鼠腦組織的自噬相關Atg-5、Beclin-1等蛋白的mRNA表

2、達;以及新生大鼠大腦皮層神經細胞中相關蛋白的表達;透射電鏡下觀察自噬體及染色的LC-3抗體的表達。并在臨床運用犀角地黃湯干預了瘀熱證型的急性腦梗死患者，并觀察相關的瘀和熱的指標變化。
　　方法:造模“瘀熱”證H型高血壓大鼠成功后采用低中高三種不同劑量犀角地黃湯（0.75g生藥/ml、1.5g生藥/ml、3.0g生藥/ml）水煎液灌服，并選擇空白對照，分別檢測各組血壓、血Hcy、TNF-α、 IL-6、 LPA、PA、及凝血功能、血

3、液流變學，并對檢測結果進行統(tǒng)計分析。造模內毒素誘導下持續(xù)性大腦中動脈栓塞模型(pMCAO)大鼠，造模后進行分組，并采用不同劑量犀角地黃湯進行干預，分別提取RNA、PCR檢測Rat-atg-5、Beclin-1等基因的表達;透射電鏡下觀察染色的LC-3抗體表達。進行新生大鼠大腦皮層神經細胞原代培養(yǎng)，并以LPS誘導神經細胞的氧化應激及凋亡，應用LPS(10ug/ml)刺激誘導神經元損傷模型，觀察自噬體及相關蛋白的表達。臨床隨機篩選80例中醫(yī)

4、辨證為瘀熱證型的腦梗死患者，分為對照組和觀察組，使用犀角地黃湯進行干預，觀察白細胞介素-6以及血漿纖維蛋白原的變化。
　　結果:治療前后比較，犀角地黃湯治療組對“瘀熱”證H型高血壓組大鼠的Hcy、TNF-α、IL-6、LPA、PA、及凝血功能、血液流變學的影響與對照組相比有明顯差異，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），尤其以中低劑量為佳?！梆鰺帷弊CpMCAO模型大鼠中Atg-5、Beclin-1mRNA的表達、模型組Atg-5和B

5、eclin-1 mRNA的表達明顯上升，犀角地黃湯中劑量治療組和陽性藥組與模型組比較均顯著降低其表達。（*p＜0.05，**p＜0.01）。LC-3抗體染色顆粒提示，空白組表達不明顯，模型組造模成功，尤其在第六天，模型組明顯增多;陽性藥組明顯抑制LC-3的表達，第三和第六天到達最佳;低劑量組抑制效果不明顯;中劑量組抑制效果好于高劑量組，第六天抑制效果最佳。對于LPS誘導神經元損傷模型，高中低劑量(40mg/ml，20mg/ml，10mg

6、/ml)的犀角地黃湯處理誘導的神經細胞12小時，中劑量組(20mg/ml)和陽性藥阿司匹林均顯著降低了atg-5和beclin-1 mRNA的表達，和模型組比有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。自噬誘導劑(rapamycin，100μmol/L)明顯逆轉了犀角地黃湯的作用，自噬抑制劑(3-MA，2mmol/L)加強了犀角地黃湯對atg-5和beclin-1 mRNA表達的抑制作用。臨床病例觀察發(fā)現(xiàn):犀角地黃湯治療組在纖維蛋白原、白介素-6等方