PKIP在胃癌組織中的低表達及對其侵襲力的影響.pdf

1、背景與目的:
　　目前胃癌是最常見的消化系惡性腫瘤之一，在我國甚至全球范圍內都有很高的發(fā)病率和死亡率[1]。而其中大約70％左右的胃癌發(fā)生在資源匱乏的發(fā)展中國家。由于胃癌的早期癥狀不明顯，在出現(xiàn)臨床征兆時多已為中晚期，治療效果差。所以降低胃癌死亡的關鍵因素是早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療。現(xiàn)在，人們通過研究胃癌的表觀遺傳學機制發(fā)現(xiàn)，胃癌發(fā)生發(fā)展和多個抑癌基因的失活關系密切[2-5]
　　最近幾年，因為發(fā)現(xiàn)RKIP能夠在多條細胞

2、信號傳導通路中發(fā)揮極其重要的功能，尤其是最新研究證實RKIP具有抑制腫瘤細胞轉移的作用之后[6]，RKIP的研究已成為腫瘤細胞生物學領域中的一個新的研究熱點。RKIP是一種高度保守的多功能蛋白，廣泛存在于人體的各個組織中，人的RKIP定位于12號染色體q24.22，含4個外顯子，其轉錄的mRNA長達1434bp，編碼187個氨基酸組成的蛋白[7]。RKIP是絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedproteinkniase

3、，MAPK)信號轉導通路的自然遏抑物，Yeung等[8]于20世紀初研究表明人PEBP可以和Raf-1連結在一塊，進而將Raf-1/MEK/ERK信號轉導通路阻遏，所以把PEBP命名為RKIP。RKIP除了抑制制Raf-1/MEK/ERK信號通路，并參與對G蛋白耦聯(lián)受體信號通路和核因子κB(nuclearfactorκB，NF-κB)信號通路的調控[9][10]。由于這幾條信號轉導通路在細胞生長、增殖、分化以及凋亡等多個方面具有重要的調

4、節(jié)作用，不難得出這個結論:RKIP與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移密切相關，與多種腫瘤的不良預后密切相關[11]。通過實驗研究證明RKIP可以抑制惡性黑色素瘤、乳腺癌、結直腸癌、肝癌等多種惡性腫瘤轉移，而且RKIP下調或缺失與前列腺癌，乳腺癌和黑色素瘤等多種人類惡性腫瘤的轉移和不良預后有關[12,13]。然而，RKIP在胃癌(GC)轉移中的作用尚未見報道，因此RKIP與胃癌發(fā)生發(fā)展的關系仍需要大量的科學研究去進一步探討。本科研小組旨在研究RKI

5、P與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關系，以及RKIP表達水平改變對GC細胞體外侵襲能力的影響。
　　材料與方法:
　　1.采集鄭州大學第一附屬醫(yī)院胃腸外科自2011年12月至2013年2月手術切除的胃癌組織極其相對應的癌旁正常組織標。所有標本病理診斷明確，術前均未行放、化療及免疫治療且所有患者均知情同意簽字為憑。手術切除標本離體后用4℃的生理鹽水沖洗掉血污，迅速置入無菌凍存管于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　2.人胃癌細胞SGC-790

6、1由鄭州大學基礎醫(yī)學院提供，為中分化胃腺癌細胞[9]，來源于56歲女性轉移性腺癌的淋巴結中的癌組織;細胞在37℃、5％CO2飽和濕度條件下，用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。
　　3.應用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術及蛋白質印跡法(WesternBlot)分別檢測胃癌組織及相應癌旁組織中RKIPmRNA和蛋白的表達，采用脂質體轉染方法將正義、反義RKIP表達質粒及其相應空白載體分別轉染SGC-7901細胞，建立相應

7、的穩(wěn)定轉染細胞系，并用Westernblot檢測轉染效果。應用Transwell細胞遷移實驗研究分析RKIP表達水平改變對GC細胞體外侵襲能力的影響。
　　4.所有實驗數據都應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。對胃癌組織和癌旁組織中的RKIPmRNA灰度值進行配對t檢驗。對臨床病理因素間的關系進行x2檢驗及Fisher確切概率法檢驗，以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計學意義的檢驗標準。
　　結果:
　　1.RKIPmR

8、NA在胃癌組織中的表達量相對值為(0.12±0.02)，癌旁組織中的表達量為(0.48±0.04)，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(t=6.562，P＜0.01)。RKIP的表達與患者性別、年齡、腫瘤大小無關，而與患者腫瘤分化程度、淋巴結轉移與否、腫瘤TNM分期及是否遠傳轉移有關（P＜0.05）。
　　2.RKIP在癌組織中的表達量(0.08±0.02)明顯低于癌旁正常組織(0.41±0.04)，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(t=7.068

9、，P＜0.01)，RKIP的表達與胃癌組織的分化程度、TNM分期、淋巴結轉移與否及是否遠處轉移有關(P＜0.05)，而與患者年齡、性別和腫瘤大小無關。
　　3.Transwell細胞遷移實驗顯示，上調RKIP表達，SGC-7901細胞的侵襲能力降低，而下調RKIP表達后SGC-7901細胞的侵襲能力明顯提高。
　　結論:
　　1.RKIPmRNA在胃癌組織中表達明顯下調或者表達缺失，并且與患者性別、年齡、腫瘤大小無關，