黃芪桂枝五物湯對奧沙利鉑所致慢性CIPN大鼠NGF及TrkA表達的影響.pdf

1、目的：通過建立奧沙利鉑致CIPN的大鼠模型，觀察疼痛行為學(xué)變化、背根神經(jīng)節(jié)細胞病理學(xué)的改變、血清及背根神經(jīng)節(jié)中神經(jīng)生長因子和其TrkA受體表達的變化，探討黃芪桂枝五物湯對奧沙利鉑所致慢性CIPN的干預(yù)作用及機制。
　　方法：選用45只成年Wistar雄性大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)后隨機分為空白組、模型組、中藥組?？瞻捉M(n=15)予腹腔注射5％葡萄糖注射液2ml/kg，其余各組(n=15)按照4mg/kg，2ml/kg予奧沙利鉑腹腔注射，每

2、周2次。同時空白組、模型組予0.9％生理鹽水灌胃(1ml/次)，每日1次，中藥組予黃芪桂枝五物湯2.48g/ml，10ml/kg灌胃，每日1次。奧沙利鉑用藥當(dāng)天，中藥在應(yīng)用奧沙利鉑前1小時灌胃。持續(xù)給藥至26天。每周稱重，每日觀察大鼠給藥后反應(yīng)。每周進行Von Frey檢測和丙酮實驗。第26天解剖每組大鼠，4％多聚甲醛心臟灌注，腹主動脈采血，取雙側(cè)L4-L5背根神經(jīng)節(jié)。1、檢測奧沙利鉑及黃芪桂枝五物湯處理后各組大鼠血清中NGF-β水平的

3、變化。2、通過尼氏染色觀察大鼠背根神經(jīng)節(jié)的病理變化并測量神經(jīng)節(jié)核仁變化。采用免疫組織化學(xué)染色的方法觀察各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)中NGF-β及TrkA受體的表達情況。3、RT-PCR、qPCR檢測各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)NGF-β及TrkA受體基因水平的變化。
　　結(jié)果：通過痛覺行為學(xué)測定和組織病理學(xué)檢測證實CIPN模型制備成功。機械疼痛閾值及冷痛覺結(jié)果示與空白組相比，模型組明顯下降(P＜0.01)，與模型組相比，中藥可減輕奧沙利鉑引起的機械疼

4、痛致敏(P＜0.01)，但其緩解冷痛覺致敏的作用無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。Elisa檢測發(fā)現(xiàn)奧沙利鉑可致血清NGF-β水平明顯降低(P＜0.01)，與模型組相比應(yīng)用黃芪桂枝五物湯則能使之明顯回升(P＜0.05)。且各組血清NGF-β的含量與機械痛閾的變化成正相關(guān)。光鏡觀察各組間背根神經(jīng)節(jié)細胞的形態(tài)和NGF-β、TrkA受體的表達情況。與空白組相比模型組核仁明顯縮小(P＜0.01)，應(yīng)用中藥后能減輕奧沙利鉑對核仁大小的影響(P＜0

5、.01)。奧沙利鉑導(dǎo)致背根神經(jīng)節(jié)細胞NGF-β、TrkA受體表達下降(P＜0.01)，使用中藥后能糾正其表達的下調(diào)(P＜0.01)。qPCR結(jié)果顯示，與空白組相比，應(yīng)用奧沙利鉑后大鼠背根神經(jīng)節(jié)NGF-β mRNA的表達出現(xiàn)下調(diào)的趨勢而TrkA mRNA的表達則呈現(xiàn)上調(diào)(P＞0.05)，與模型組相比，黃芪桂枝五物湯可以上調(diào)NGF-β mRNA的表達，而對TrkA的轉(zhuǎn)錄無影響(P＞0.05)。
　　結(jié)論：黃芪桂枝五物湯在改善奧沙利鉑所